甘丙肽2型受体(GalR2)是特异性传递甘丙肽信号的三种甘丙肽受体亚型之一,属于G蛋白偶联受体(GPCRs)超家族。GPCRs被配体激活后,与G蛋白结合传导下游信号,从而引发多种多样的生物学反应。GPCRs的转运与信号传导密切相关。大多数GPCRs与G蛋白结合后招募β-arrestin并与之相互作用,后者介导GPCRs的脱敏和内化。内化后的受体进入内涵体进行下一步分选和转运。此外,部分GPCRs可以形成二聚体,而受体的二聚化在受体的转运和信号的调节中发挥重要的作用。因此,明确GalR2的转运特征以及是否形成二聚体对进一步研究其下游信号传导机制及其调控具有重要的意义。　　 本实验第一部分以C端融合了EGFP的GalR2(GalR2-EGFP)为研究对象,通过在激光共聚焦下观察荧光共定位的方法初步探讨了GalR2的内在化转运途径,即由β-arrestin介导的内在化入胞,内化后的受体进入早期内涵体和晚期内涵体。值得注意的是,无论过表达C端融合DsRed的β—arrestin2(β-arrestin2-DsRed)还是免疫荧光标记内源性β-arrestin结果都显示了β-arrestin与GalR2的结合是稳定持久的,二者共同内化,提示GalR2可能倾向于表现ClassB型受体的特征。为验证GalR2是否形成同源二聚体,本实验第二部分分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有条带之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置也有条带,提示GalR2可能是以二聚体的形式存在的。共转染HA-GalR2和FLAG-GalR2,通过免疫共沉淀的方法,在抗HA的免疫片段中检测到了FLAG的免疫活性,且在相当于单倍分子量和二倍分子量上均有条带；反过来,在FLAG的免疫片段中检测HA的免疫活性,条带同样出现在单倍分子量和二倍分子量上。以上结果表明甘丙肽2型受体之间形成了同源二聚体。