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目的：建立Allo-A Sepharose亲和层析技术分离血清中Tf和CDT，然后用直接夹心ELISA分别测定Tf和CDT水平。方法1．建立转铁蛋白直接夹心ELISA测定技术。用抗人Tf IgG和HRP标记羊抗人Tf抗体建立直接夹心ELISA用于Tf和CDT的定量测定。以重复率和回收率评价所建立的直接夹心ELISA。2．Allo-A Sepharose 4B亲和层析分离CDT。用Allo-A和CNBr活化的Sepharose 4B制备Allo-A Sepharose 4B亲和层析柱，用于血清Tf和CDT的分离。建立的Allo-A Sepharose 4B亲和层析技术用固相pH梯度等电聚焦电泳(IPG IEF)和Western blot评价。3．人血Tf和CDT的分离和测定要测定的血清先由亲和层析分离Tf和CDT，然后测定用直接夹心法测定洗脱液中的Tf和CDT。结果1．建立转铁蛋白直接夹心ELISA测定技术鼠抗人Tf IgG包被浓度初步确定为2.5μg／ml。确定HRP标记羊抗人Tf抗体最适稀释度初步确定为1／2000。Tf的浓度与450nm光密度极为相关(R~2=0.9845)。不同浓度的人Tf标准品及血清样品的变异系数(CV％)为1.8％～7.52％。所观察的4份酗酒者血清，回收率为96％～105.7％。2．Allo-A Sepharose 4B亲和层析分离CDT。2．1 Allo-A与CNBr-activated Sepharose 4B的偶联，共进行了4次偶联实验，偶联率为80.6～91.4％，CV=4.9％。2．2 Allo-A Sepharose 4B亲和层析分离CDT Allo-A Sepharose 4B亲和层析图谱显示2个洗脱峰，CDT存在于第一洗脱峰，Tf存在于第二沈脱峰。2．3 Tf和CDT的鉴定等电聚焦电泳和免疫印记结果表明，在本实验确定的分离条件下，Allo-A Sepharose 4B亲和层析可有效分离CDT和Tf。3．人血Tf和CDT的测定Tf水平与OD450nm呈线性关系(R~2=0.9917)。正常人血清CDT平均水平为27.02μg／ml，99％可信限为23.1～30.9μg／ml；Tf平均水平为1998.0μg／ml，99％可信限为1606.1～2389.9μg／ml，CDT与Tf比值为1.45％。酒精性肝病患者血清CDT平均水平为36.9μg／ml，高于正常人血清CDT水平。Tf平均水平为720.7μg／ml，显著低于正常人水平。CDT与Tf比值为5.1％。结论1．本实验建立的Tf直接夹心ELISA方法具有较理想的灵敏度、精密度和可靠性。2．本实验建立的Allo-A Sepharose 4B亲和层析技术适用于血清Tf和CDT分离。从Allo-A Sepharose 4B层析柱的制备到Tf和CDT的分离，操作简便易行，不需昂贵设备，因而可作为常规技术广泛应用。3．通过Allo-A Sepharose 4B亲和层析技术联合使用Tf直接央心ELISA方法对20例正常人和27例酒精性肝病患者的初步观察，发现酒精性肝病患者血清CDT水平高于正常人，而Tf水平则低于正常人。CDT／Tf比值在酒精性肝病患者也升高，比值的升高主要由Tf水平降低所致。4．根据对正常人和酒精性肝病患者的观察结果，Allo-A Sepharose 4B亲和层析技术联合使用Tf直接夹心ELISA方法可作为常规检测技术，用于酒精性肝病的诊断。