论文部分内容阅读
目的:通过建立大脑中动脉闭塞的脑缺血大鼠模型,观察补阳还五汤联合BMSCs移植对脑缺血大鼠神经功能缺损评分、病理学改变以及对Notch信号通路的影响,研究Notch信号通路在脑缺血之后的变化规律,探讨补阳还五汤和BMSCs移植对脑缺血的神经保护作用是否与Notch信号通路有关系,有望为脑缺血的治疗提供一个新的思路。方法:将动物随机分为5组,采用线栓法制作大脑中动脉闭塞的大鼠模型,分为空白组、模型组、补阳还五汤组、BMSCs移植组、补阳还五汤和BMSCs移植联合组。采用全骨髓培养法提取骨髓基质干细胞,进行培养传代,至细胞形态基本变为细长梭形之后,采用流式细胞术进行鉴定,在移植之前用Brdu进行标记,通过尾静脉移植BMSCs,对移植组及联合组进行Brdu-DCX免疫荧光双标检测,造模后用Zea-Longa法进行神经功能缺损评分;HE染色观察缺血区的病理学变化;免疫组织化学法测定大脑组织缺血部位Notch信号通路Notch1、Hes1、Jagged1的阳性表达。结果:(1)神经功能缺损评分结果:24h时间点,与模型组进行比较,联合组的评分降低,差异有统计学意义(P<0.05);7d、14d两个时间点,与模型组、补阳还五汤组、BMSCs移植组相比,联合组各组评分均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);14d时间点,与BMSCs移植组相比,补阳还五汤组评分降低显著,有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色结果显示,24h各组均可见细胞排列松散,数量减少,形态异常,有空泡、成三角形等,核固缩、细胞间质染色稀疏,胞浆染色较深。与模型组相比,补阳还五汤组、BMSCs移植组及联合组都在不同程度上,减轻了异常的形态学改变,到7d、14d时各组的病理学异常改变逐渐减轻,但联合组的细胞形态改善更明显。(3)Notch信号通路关键分子的蛋白表达:(1)各组notch1的阳性细胞表达:24h、7d、14d各时间点,与空白组相比,其他各造模组大鼠缺血区Notch1蛋白阳性表达量增加显著,具有统计学意义(p<0.05);与模型组相比,联合组的阳性细胞数增加显著,有统计学意义(p<0.05);与补阳还五汤组和BMSCs移植组相比,联合组增加显著,有统计学意义(p<0.05);7d、14d时间点,与模型组相比,补阳还五汤组和BMSCs移植组阳性细胞数增加显著,有统计学意义(p<0.05)。(2)各组jagged1的阳性蛋白表达:24h、7d、14d各时间点,与空白组相比较,其他各造模组大鼠缺血区jagged1蛋白阳性表达量增加显著,具有统计学意义(p<0.05);与模型组、补阳还五汤组、BMSCs移植组相比较,联合组的阳性细胞数增加显著,有统计学意义(p<0.05);7d、14d时间点,与BMSCs移植组相比,补阳还五汤组增加显著,有统计学意义(p<0.05);与模型组相比较,补阳还五汤组和BMSCs移植组阳性细胞数增加显著,有统计学意义(p<0.05)。(3)各组hes1的阳性蛋白表达:24h、7d、14d各时间点,与空白组相比较,其他各造模组大鼠缺血区hes1蛋白阳性表达量增加显著,具有统计学意义(p<0.05);与模型组、补阳还五汤组、BMSCs移植组相比较,联合组的阳性细胞数增加显著,有统计学意义(p<0.05);与移植组相比较,补阳还五汤组增加显著,有统计学意义(p<0.05);造模7d、14d时间点,与模型组相比较,补阳还五汤组和BMSCs移植组阳性细胞数增加显著,有统计学意义(p<0.05)。结论:补阳还五汤联合BMSCs移植治疗脑缺血大鼠可以对脑缺血的病理改变和神经功能缺损症状都起到促进恢复的作用,其机制可能与促进Notch信号通路中Notch1、hes1、jagged1的蛋白的表达水平增加,促进神经干细胞增殖有关。