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干扰素调节因子(interferon regulatory factor, IRF)在细胞抗病毒先天免疫反应过程中有着重要的调节作用。近年来,虽然对鱼类干扰素系统研究取得重大进展,但对其具体信号转导路径和分子机理仍不甚清楚。本研究成功克隆与鉴定了草鱼干扰素调节因子2(CiIRF-2)和调节因子3(CiIRF-3),并着重对实验室前期克隆的IRF-1的功能进行了分析。结果显示：CiIRF-2全长cDNA为1809bp,其中包括35bp的5’非翻译区(5’-UTe.)、793bp的3’非翻译区(3’-UTR)和1个编码326个氨基酸的981bp的最大开放阅读框(ORF)。这个推测的CiIRF-2多肽序列中存在1个含有6个保守色氨酸(W)残基的保守DNA结合结构域(DBD)。多重比对分析表明,CiIRF-2与多种硬骨鱼类及其他高等哺乳动物的IRF-2具有较高的同源性,且与斑马鱼的关系最为密切。CiIRF-3的全长cDNA包含1831bp,其中含1个262bp的3’-UTR、1个192bp的5’-UTR及1个1377bp的最大ORF。这个ORF编码458的氨基酸的蛋白质,其N-端包含一个含有5个保守色氨酸的DBD结构域,而其C-端则包含1个较保守的IRF协助结构域(IAD)。多重比对分析表明,CiIRF-3与其他比对的其他高等脊椎动物的IRF-3具有较高的同源性。除脑组织外,CiIRF-3在各检测组织中的本底表达水平均较低,经Poly I:C刺激后,各检测组织中CiIRF-3的转录表达水平迅速上升,在肝脏组织和脾脏组织中变化量最为明显。凝胶阻滞实验表明原核表达纯化的CiIRF-3与草鱼IFN启动子片段有较强的亲和性。该结果表明CiIRF-3可能与草鱼IFN的转录有着潜在的密切关系。RT-PCR表明在所检测的组织中CiIRF-1均有较低的本底表达,如果受到PolyI：C或重组草鱼干扰素(rCiIFN)刺激后,CiIRF-1的表达量将迅速上调。体外凝胶阻滞实验表明,重组CiIRF1与草鱼IFN及IRF1的启动子片段均有不同程度的结合。重组质粒pcDNA3.1-CiIRF-l与pGL3-CiIFNPs/IRF1-promoter共转染草鱼肾脏细胞(CIK)或人脐静脉内皮细胞(HUVEC),然后检测荧光信号。结果表明,单独转染pGL3-CiIFNPs/IRF1-promoter的细胞荧光信号要比其与pcDNA3.1-CiIRF-1共转染的细胞荧光信号更弱。综合以上结果,表明CiIRF-1在草鱼IFN及IRF1的转录过程中发挥正调控作用。