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[目的]
研究骨髓间充质干细胞(BonemarrowMesenchymalStemCells,BMMSCs)对骨髓CD34+细胞增殖的影响,为骨髓CD34+细胞体外扩增的深入研究提供依据。
[方法]
①VarioMACS分选器进行骨髓CD34+细胞的分选,用流式细胞术进行骨髓CD34+细胞纯度鉴定;②采用密度梯度离心法分离引产胎儿骨髓单个核细胞,结合贴壁法进行BMMSCs的体外扩增培养,并用流式细胞术进行BMMSCs表面标志鉴定;③用Transwell培养板培养骨髓CD34+细胞与BMMSCs,自动细胞计数仪计数有活性的骨髓CD34+细胞数量,并采用MTT比色法检测骨髓CD34+细胞增殖活性。
[结果]
①流式细胞术检测显示分选所得的骨髓CD34+细胞纯度通常可达到90%以上;②流式细胞术检测显示传至第3代继续培养72h后的BMMSCs高表达CD44、CD29,而HLA-DR、CD45、CD34阴性表达,说明所培养的BMMSCs纯度很高;③Transwell培养板培养骨髓CD34+细胞与BMMSCs,倒置显微镜下观察以及自动细胞计数仪计数发现,实验组有活性的骨髓CD34+细胞数量高于对照组(P<0.05);采用MTT比色法检测骨髓CD34+细胞的增殖活性,实验组高于对照组(P<0.05)。
[结论]
BMMSCs有促进骨髓CD34+细胞增殖的作用,这种作用的发挥可能与其分泌的细胞因子有关。