不同消毒方法对同种异体半月板移植效果的研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:s83436776
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相关研究指出,半月板具有缓冲应力、吸收震荡、增大关节接触面积降低局部应力、稳定并润滑关节、营养关节软骨等作用,在维持膝关节功能方面至关重要。Arnoczky等于1982年提出了半月板血供三区分类法,其中的白区损伤将致使受损区域丧失修复能力。而半月板损伤或切除后关节软骨损害继而出现关节炎可能与胫骨关节面应力的改变有关,Seedholm BB和Walker PS等研究表明,内侧半月板承受内侧间室50%的应力,外侧半月板承受外侧间室70%的应力,即使半月板切除20%也可使关节软骨承受的应力增加350%。此外,Fairbanks等最早指出,半月板损伤或缺失会产生关节面的磨损、关节软骨增生等一系列表现,进而导致或促进骨关节炎的发生发展,并得到了相关研究的证实。迄今为止,同种异体半月板移植是半月板损伤非常有前景的治疗方法,且国内外有同种异体半月板移植以纠正胫股关节面应力的报道,相关的基础和临床研究逐渐发展完善。但就同种异体半月板移植而言,其来源在伦理和法律方面受到很大限制,尤其是现有的消毒方法和贮存工艺尚不能满足临床需要,且国内外的相关报道较少,现利用家兔模型就不同消毒方法对同种异体半月板移植效果进行实验研究,为相关基础研究和临床应用以及同种异体半月板移植的标准化和规范化提供参考。目的比较不同消毒方法对家兔膝关节半月板的消毒效果;观察不同消毒方法对同种异体半月板移植效果的影响并寻找出适宜的消毒方法指导相关临床应用。方法选取22只新西兰大白兔(2.5±0.5Kg),用50ml注射器经耳缘静脉注入20ml空气,待兔子死亡后在局部无菌条件下摘取所需的双侧膝关节内外侧半月板85个,将所摘取的半月板随机分为五组并立即对所有半月板标本种植金黄色葡萄球菌(SA):碘伏组、钴60组、戊二醛组、环氧乙烷组、生理盐水组(对照组),金黄色葡萄球菌种植完毕分别从每组随机抽取7个标本进行细菌定量检测,其余标本分别用钴60组辐照、戊二醛浸泡、环氧乙烷熏蒸、碘伏浸泡、生理盐水浸泡等方法进行消毒灭菌。消毒完成再从各组随机抽取7个标本再次进行细菌定量检测,并记录各组标本消毒前后的细菌数量,余下3个标本在消毒完成后立即用10%的甲醛固定液固定,然后进行组织学观察,数据收集完毕进行统计学分析。另选取13只新西兰大白兔(2.5±0.5Kg)用50ml注射器经耳缘静脉注入20ml空气栓塞致死后摘取所需半月板标本50个立即在-40°条件下深冻1个月。半月板标本深冻完毕随机分为五组:碘伏组、钴60组、戊二醛组、环氧乙烷组、生理盐水组(对照组),分别对各组标本进行消毒以备移植。选取日本大耳兔50只(2.5±0.5Kg)随机编入供移植的各组半月板标本内:碘伏组、钴60组、戊二醛组、环氧乙烷组、生理盐水组(对照组),将已消毒好的新西兰大白兔半月板分别逐一移植到日本大耳兔右下肢膝关节内,6周后分别取出各组标本,每组随机选取7个标本进行生物力学检测,其余3个标本用10%的甲醛固定液固定进行组织学观察。结果细菌定量检测结果显示,五个分组中的85个半月板标本接种SA48小时后均种植成功,标本上的SA数量平均从5.26x102/个到6.29x102/个不等;其中碘伏组最多,钴60组细菌数量最少,统计结果提示各组间差异无统计学意义(P>0.05)。采用五种不同的消毒方法处理后的结果显示,钴60组、戊二醛组、碘伏组、环氧乙烷组半月板标本的SA计数数量均数均<1/个,氯化钠组SA均数为415/个。钴60组、环氧乙烷组、戊二醛组、碘伏组灭菌率均为100%,氯化钠组灭菌率仅为81.854%。病理检查结果提示:各组标本的组织结构中均有大量的细胞核,碘伏组结构保存最为完整;钴60组和戊二醛组结构保存较为完整,排列相对规则整齐,广泛分布有较小的孔隙;氯化钠组结构破坏较为严重,排列较迂曲,广泛分布有大量的较大的孔隙;环氧乙烷组结构破坏最为严重,结构迂曲,排列紊乱不规则,广泛分布有大量的大孔隙或有组织缺损。五种不同消毒方法处理后的同种异体半月板移植6周后的生物力学检测结果(压力负荷)提示,碘伏组半月板标本能够承受的压力最大,平均为270N,环氧乙烷能够承受的压力最小,平均为为40N。统计结果提示,碘伏组、钴60组、戊二醛组、氯化钠组标本承受的平均压力均大于环氧乙烷组且差异有统计学意义(P<=0.01);碘伏组标本能够承受的平均压力大于钴60组和氯化钠组且差异有统计学意义(P<=0.05);戊二醛组标本能够承受的平均压力大于氯化钠组且差异有统计学意义(P<=0.05),其余各组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。病理检查结果提示:与移植前相比,各组半月板标本组织结构均有不同程度的破坏,且由外向内有细胞浸润。碘伏组结构最为完整,结构排列整齐规则,广泛分布有均匀细小的孔隙,少许部位有受体新组织长入;钴60组结构相对较为完整,结构排列相对规则稍迂曲,广泛分布有均匀的较小的孔隙,少许部位有受体新组织长入;戊二醛组结构相对完整,排列规则整齐,广泛分布有均匀的较小的孔隙;氯化钠组结构破坏较为严重,排列迂曲欠规则,广泛分布有大量的较大的孔隙甚至断裂,有受体新组织长入;环氧乙烷组结构破坏最为严重,广泛分布有大量断裂游离的组织碎片,结构紊乱极不规则,孔隙大或组织缺损严重。结论碘伏、钴60、戊二醛、环氧乙烷四种消毒方法均能够有效杀灭同种异体半月板组织上的病原微生物(SA),前三种消毒方法在达到同种异体半月板临床灭菌要求的同时均能使同种异体半月板维持一定的抗压强度,其中经碘伏消毒的同种异体半月板结构保存最为完整且生物力学性能良好。因此,我们推荐采用碘伏浸泡的消毒方法对同种异体半月板组织进行消毒,经戊二醛消毒的同种异体半月板抗压强度最大,该方法经过改良后可以为我们提供另外一种可能选择。经环氧乙烷消毒的半月板结构破坏非常严重,虽然其灭菌效果很好,但其丧失了临床应用所需的抗压强度,无法发挥半月板应有的作用,因此不推荐其用于同种异体半月板组织的消毒。
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