随着免疫分析技术的发展及近几年食品安全等问题不断升级,金免疫层析技术以其特有的竞争优势在临床、现场检测和家庭自检中发挥着越来越重要的作用,但国内相关研发水品与国外却存在着很大的差距。本文旨在通过盐酸克伦特罗试纸条的工艺路线研究建立起从抗原设计到试纸条调试的整个免疫层析研发技术平台。首先根据盐酸克伦特罗的分子特征进行抗原设计,目前市售产品的盐酸克伦特罗完全抗原均采用重氮法合成,而本文则通过戊二醛法将抗原和偶联蛋白通过“五碳桥”连接起来,降低了载体蛋白的空间位阻效应,使得戊二醛法合成的完全抗原(OVA-GA-CL,偶联比25.2:1)相对于重氮法合成的完全抗原(OVA-CL,偶联比28.8:1)更易于捕获抗体。同时,通过亲和层析法和饱和硫酸铵法纯化的抗体经间接ELISA法检测,其效价分别为1:16000和1:32000。虽然相对于抗血清而言,纯化抗体的效价有所下降,但SDS-PAGE分析结果显示抗体纯度有很大的提高。其次,采用改进的Frens法制备胶体金溶液,操作工艺条件为:旋转蒸发仪水浴加热,将预热至80℃的氯金酸加入到柠檬酸三钠溶液中,最终制备出颗粒均一、单分散的10nm的胶体金溶液并通过透射电镜和全波长扫描等手段加以鉴定。最后,通过对样品垫预处理液、金标垫预处理液、抗原和抗体包被缓冲液、金标稀释液及金标制备工艺等的优化和调试,最终确定盐酸克伦特罗快检试纸条的灵敏度为16ng/mL。并经时间稳定性和重复性试验结果表明,本研究制备的试纸条可在常温保存3个月且批间和批内的重复性高达95%,显示出良好的应用前景。