血管内皮祖细胞移植治疗动脉硬化闭塞的动物实验研究

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目的:观察同种异体骨髓来源的血管内皮祖细胞移植治疗实验性Wistar大鼠下肢动脉硬化闭塞症的可行性与疗效。方法:选取24只雄性Wistar大鼠,分别结扎并离断双侧股动脉的分支,双侧股动脉予有齿镊沿股动脉走形钳夹约30s,并予高脂饲料常规喂养,下肢肌注维生素D330万u/kg,每月一次。建立实验性股动脉硬化闭塞大鼠模型。分离纯化雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,VEGF、EGF、bFGF、IGF-1多种生长因子联合诱导分化成血管内皮祖细胞后,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记;12只实验性双股动脉硬化闭塞大鼠右侧后肢移植BrdU标记的血管内皮祖细胞(B组);同体左侧相同部位注射生理盐水作为对照(A组)。分别于移植后第14天和第28天处死动物取双下肢肌肉组织,行免疫组织化学(FV111、BrdU)检测。结果:移植后14天B1组平均每中倍视野FⅧ染色阳性的毛细血管数多于A1组,分别为B1:4.556±0.506个和A1:2.867+0.915个(P<0.05);移植后28天B2组平均每中倍视野FⅧ染色阳性的毛细血管数目显著多于A2组,分别为B2:5.941±1.324个和A2:3.000±0.707个(P<0.05)。BrdU免疫组化染色发现B组肌束间有血管内皮细胞呈现Brdu阳性染色,而A组无一例呈现Brdu阳性染色。结论:成功制备了同一活体双下肢实验性股动脉硬化闭塞大鼠模型。分别用同种异体大鼠MSCs体外培养并诱导分化而来的血管内皮祖细胞予BrdU标记后移植,移植侧与对照侧相比,缺血肌肉组织毛细血管密度显著增多,且在移植处增多的毛细血管内皮细胞中,发现有BrdU染色阳性的内皮细胞,证实增殖的新生血管来源于外源性血管内皮祖细胞。本研究说明骨髓间充质干细胞中含有血管内皮祖细胞,能在缺血的活体组织中增殖分化成新生毛细血管的内皮细胞,其血管再生作用显著超过大鼠自身在缺血环境中的血管再生
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