【摘 要】
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鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus,DTMUV）在禽类中传播速度快,致病性高,防控困难并具有跨种传播的可能性,严重影响禽类养殖业健康发展。虽然目前已有DTMUV弱毒疫苗和灭活疫苗,但这些疫苗在实践中存在一定的风险性和局限性,开发安全高效、使用便捷的免疫制剂有较强应用价值和现实意义。本课题基于酿酒酵母表达系统,构建表达DTMUV保护性抗原E蛋白的分泌表达型、表面展示型和分泌-表面展示
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鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus,DTMUV）在禽类中传播速度快,致病性高,防控困难并具有跨种传播的可能性,严重影响禽类养殖业健康发展。虽然目前已有DTMUV弱毒疫苗和灭活疫苗,但这些疫苗在实践中存在一定的风险性和局限性,开发安全高效、使用便捷的免疫制剂有较强应用价值和现实意义。本课题基于酿酒酵母表达系统,构建表达DTMUV保护性抗原E蛋白的分泌表达型、表面展示型和分泌-表面展示双表达型重组酿酒酵母菌株,并对其生物学特性,小鼠口服后的免疫相关指标进行了评价,主要研究结果如下:（1）DTMUV-E蛋白重组酿酒酵母菌株的构建:选择优化DTMUV E蛋白表达框并构建完整转录单位,分别以酿酒酵母S.cerevisiae菌株ST1814G和JDY52为载体,成功构建了表面展示型重组酵母菌株ST1814G/Aga2-E、分泌表达型重组酵母菌株JDY52/xyn2s-E、分泌-表面展示双表达型重组酵母菌株JDY52/xyn2s-E-Aga2-E。（2）DTMUV-E蛋白重组酿酒酵母菌株主要生物学特性分析:Western blot、免疫荧光和流式细胞术检测结果显示,ST1814G/Aga2-E菌株能够良好表达且高效表面展示目的蛋白,最佳表达时间为36 h;JDY52/xyn2s-E可良好表达且分泌目的蛋白到胞外,最佳表达时间为48 h;JDY52/xyn2s-E-Aga2-E菌株实现表面展示及分泌E蛋白的双表达,最佳表达时间为48 h。对三种重组酿酒酵母菌株的发酵动力学研究表明,外源表达基因的插入只减缓酵母菌株初期生长,对后期生长无影响。（3）DTMUV-E蛋白重组酵母口服小鼠后相关免疫指标变化分析:酿酒酵母口服免疫制剂能显著诱导机体特异性体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫应答反应;酵母口服免疫制剂双向调节机体免疫,一方面提高机体免疫应答能力,安全有效,另一方面则负向抑制炎症反应,避免因过度免疫反应对机体造成损伤。此外,口服酿酒酵母免疫制剂可改善小鼠肠道微生物多样性,调节肠道菌群结构,维持肠道健康稳态。综上,本研究成功构建的用3种不同表达方式高效稳定表达DTMUV E蛋白的重组酿酒酵母菌株可作为鸭坦布苏病毒病防治的潜在候选菌株。
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