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目的:课题组前期研究表明,升陷汤方剂具有良好的抗心力衰竭作用,能够降低阿霉素的心脏毒性,而病理情况下升陷汤的代谢情况尚不明确。因此,本课题研究病理状态下升陷汤主要成分的药代动力学特点,通过与正常大鼠体内药代动力学比较,寻找主要成分的代谢特点差异,以期为升陷汤的合理用药提供理论依据。方法:1.利用UPLC-MS/MS方法,测定升陷汤样品中18种主要成分包括咖啡酸、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、异阿魏酸、芒柄花素、芒柄花苷、芒果苷、新芒果苷、桔梗皂苷D、芦丁、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ、黄芪甲苷、升麻素苷、槲皮素的含量。2.利用UPLC-Q-TOF-MS液质联用技术,对大鼠灌胃给予升陷汤提取物(608 mg/kg,相当于生药量70.6g/kg),对血中移行原型成分进行鉴定分析,快速筛选药效物质。3.利用阿霉素对心脏损伤为慢性、蓄积性的特点,采用多次腹腔注射,累积剂量15 mg/kg,建立大鼠心力衰竭模型。4.利用UPLC-MS/MS方法,测定升陷汤中18种主要成分的血浆药物浓度。5.对正常和模型大鼠单次灌胃给予升陷汤后,收集血浆样品,测定其主要成分在血浆中的浓度,确定这些成分在正常和模型大鼠吸收特征,并进行药代动力学参数的比较。结果:1.咖啡酸、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、异阿魏酸、芒柄花素、芒柄花苷、芒果苷、新芒果苷、桔梗皂苷D、芦丁、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ、黄芪甲苷、升麻素苷、槲皮素在升陷汤提取物中的含量分别为0.42、0.55、9.28、1.49、0.34、0.19、3.33、35.37、59.34、1.58、0.09、31.73、29.76、1.18、420.47、0.31、0.31、0.45μg/mg。由检测结果可以看出,提取物中含量较高的为来源于知母的知母皂苷BⅡ、新芒果苷和芒果苷,来源于柴胡的柴胡皂苷A和柴胡皂苷D。2.升陷汤提取物中18个原型成分都能在入血成分中一一指认。3.与正常组大鼠相比,模型组大鼠精神状态表现差,进食逐渐减少,体重明显减轻;心脏的收缩和舒张功能明显障碍;心肌细胞出现水肿,大量空泡变性,伴有大量巨噬细胞、淋巴细胞浸润等现象;大多数线粒体水肿,嵴断裂溶解消失,线粒体膜磷脂定位呈脱失性改变。4.方法学验证结果显示标准曲线在待考察的浓度范围内均显示良好的线性;蛋白沉淀法得到的提取回收率和基质效应都在规定范围之内;待测组分在大鼠血浆中的精密度和准确度均符合生物样品的分析要求;样品各项稳定性符合生物样品的分析要求。5.本实验结果显示,与正常大鼠相比,心力衰竭大鼠口服升陷汤后,来源于黄芪的成分毛蕊异黄酮的AUC(0-t)减少,MRT、T1/2、Cmax均降低,黄芪甲苷的AUC(0-t)增加,T1/2和Cmax均升高,芒柄花素的AUC(O-t)、MRT、T1/2、Cmax均降低,芒柄花苷的AUC(O-t)增加,T1/2降低;来源于知母的成分知母皂苷AⅢ的AUC(O-t)、AUC(0-∞)增加,T1/2升高,Cmax降低,知母皂苷BⅡ的AUC(0-∞)增加,T1/2升高,Cmax降低;来源于柴胡的成分芦丁的AUC(O-t)、AUC(0-∞)减少,MRT、T1/2、Cmax均降低;来源于升麻的成分升麻素苷的AUC(0-∞)减少,T1/2降低,Cmax升高,阿魏酸的AUC(O-∞o)增加,T1/2升高,Cmax降低,以上结果均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.采用超高压液相与高分辨率质谱联用技术,完成了升陷汤提取物中主要成分的含量测定,为升陷汤质量控制提供依据,确保实验中升陷汤方剂的质量稳定、可控。2.大鼠口服升陷汤后,基于只有被吸收入血的成分才能产生治疗作用的药理学理论,通过血清药物化学研究,明确了正常大鼠给药后血清中升陷汤的原型成分。3.多次腹腔注射阿霉素可建立大鼠心力衰竭模型,并且可以通过大鼠一般行为指标、超声心动图、心肌组织病理、心肌组织超微结构电镜等多个层面判定大鼠心脏功能,表明阿霉素腹腔注射给药造模稳定性好,成功率高。4.本方法采用的内标是氨氯地平和华法林作为内标,采用的是蛋白沉淀法处理血浆样品,采用的是Agilent 1260超高效液相色谱-G6460A三重四级杆串联质谱联用仪,质谱条件采用多重反应离子监测模式正负离子同时检测的简便、快捷方法,为后期实验检测提供了参考。血浆中升陷汤提取物18种主要成分线性关系良好(R2>0.98),且准确度、精密度、提取回收率、基质效应、稳定性等均在可接受范围内,且均符合2015版《中国药典》9012生物样品分析的要求。因此,该方法适用于升陷汤主要成分血浆药物浓度的检测,可为后续药动学研究提供参考。5.心力衰竭病理状态显著的影响了升陷汤在体内的药代动力学行为,提示临床若参考正常机体使用升陷汤,用药按照正常机体药代动力学参数进行治疗,可能会出现疗效不佳的情况,可根据病理状态下机体药代动力学参数进行调整用量以保证疗效。