论文部分内容阅读
萝卜硫素（1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷，Sulforaphane，1-isothiocyanato-4-（methysulfiny）-butane）是葡萄糖莱菔子苷（硫代葡萄糖苷的一种）经黑芥子酶酶解或酸水解产生的一类异硫代氰酸盐，是迄今为止蔬菜中发现的抗癌活力最强的活性物质，相对分子质量为177.29，分子式C6H11S2NO，结构式如下：本课题以西兰花种子为原料，研究了西兰花种子中硫苷的酶解条件及其产物萝卜硫素的提取、分离纯化工艺，并鉴定其结构，为开发萝卜硫素相关产品奠定了基础。通过研究溶剂、超声、脱脂对萝卜硫素提取的影响，确定了提高样品中萝卜硫素含量的提取工艺：西兰花种子→粉碎→酶解8h→冷冻干燥→丙酮超声浸提60min→纱布过滤→滤液浓缩→水定溶→高速离心→0.22μm水系滤膜过滤→HPLC分析。硫代葡萄糖苷的降解过程十分复杂，长期以来一直是研究的难点，主要产物是腈类化合物和异硫代氰酸盐，反应产物和反应速度与外界条件有关。通过研究酶解时间、温度、pH、抗坏血酸和水的加入量对硫苷酶解为萝卜硫素的影响，确定了西兰花种子中硫苷的最佳酶解条件：酶解时间8h，温度25℃，pH4.0，抗坏血酸0.02mg／g，加水量只要能完全浸湿种子粉末就行，一般是种子／水（w／v）=1∶2（g／mL）比较好。对于萝卜硫素样品的分离纯化工艺研究，首先用硅胶柱层析初步分离硫苷酶解产物，然后再用Sephadex LH-20凝胶柱层析纯化萝卜硫素粗样，最后用制备型高效液相色谱仪制备萝卜硫素样品，收集萝卜硫素的馏分，冷冻干燥后再用HPLC检测其纯度，结果表明样品中萝卜硫素的纯度达到了92.8+1.2％。样品经GC／MS检测，样品的质谱图与萝卜硫素标准质谱图的对照，结果与其谱库检索相关性为94.96％，所以基本确定该化合物为萝卜硫素。经NMR检测，与文献中报道的萝卜硫素的核磁数据基本一致，可以确定样品为萝卜硫素。本研究为对西兰花种子中硫苷酶解和萝卜硫素的提取分离方法进行了有益的探索，并成功得到了萝卜硫素的纯品，为大规模从西兰花种子中提取分离萝卜硫素奠定了基础，也为今后进一步开发抗癌新药提供了科学依据，但还要加强对这些天然物质的抗肿瘤活性研究。