SNX10诱导成泡活性与PtdIns3P介导的内涵体定位之间关系研究

来源 :中国科学院华南植物园 中国科学院华南植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jmzsren1
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Sorting Nexins(SNXs)蛋白家族具有典型的phox homology(PX)结构域,广泛参与胞内蛋白的分选、运输及信号转导。SNX蛋白的PX结构域能够通过与磷脂酰肌醇(Pls)结合帮助SNX定位到磷脂酰肌醇丰富的膜上,SNX家族除了具有PX结构域之外,还具有蛋白:蛋白相互作用,蛋白:脂类相互作用结构域。我们最近发现位于早期内涵体上的Sorting Nexin10(SNX10)能够诱导哺乳动物细胞成泡,参与内涵体的形态建成,但是我们对成泡的机制及决定成泡的关键氨基酸信息并不清楚。根据PX结构域保守性氨基酸分析,SNX10PX结构域中主要参与Ptdlns3P结合的位点是Arg53、Lys79和Arg94。我们把53位精氨酸突变成丙氨酸,发现突变体成泡能力下降,但是并没有丧失,在此基础上,我们进一步突变保守的79位赖氨酸、94位精氨酸,发现两点和三点突变只能增强成泡抑制,并不能完全消除成泡。而保守性位点Arg52和非保守性位点Arg51突变,SNX10会完全丧失成泡能力,同时发现54位酪氨酸突变成丙氨酸会部分丧失成泡能力,进而发现这些突变体都失去Ptdlns3P结合能力和内涵体定位,弥散在胞浆中。为了进一步确定这些氨基酸在SNX10成泡中的具体作用和SNX10成泡和内涵体定位的关系,我们把p40Phox的PX结构域氨基酸序列(p40PX)接到这些突变体的N末端,发现能把这些突变嵌合体重新定位到内涵体上,并且能恢复51位突变体的成泡活性,增强53位、54位突变体的成泡活性,但是不能恢复52位突变体的成泡活性。最后我们把突变体SNXIOR51A定位到质膜(PM)、线粒体和细胞核,发现在这些细胞器上并不能诱导成泡。综上所述,SNX1051、52、53和54位氨基酸对其成泡都有影响,但影响程度和方式不同,p40PX能恢复SNX10突变体的成泡活性,SNX10诱导成泡具有内涵体定位依赖性。
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