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肝癌是全球高发的恶性肿瘤之一，起病隐匿，侵袭生长快，恶性程度高，预后差。因其发病机制的不确定性及早期诊断困难等因素存在，术后的复发率高，仍然缺乏有效的治疗手段。因此，阐明肝癌的发病机制，争取早期诊断，寻求有效的治疗手段是急待解决的重要课题。肝癌的发生发展机制是一涉及多基因调控、多信号通路参与的复杂的网络体系是同时牵涉时间和空间概念的四维概念，其中主要是遗传学及表观遗传学的异常。而癌基因的激活与抑癌基因的失活是其重要的遗传学基础。相对于因功能获得性变异而导致的癌基因激活，抑癌基因的失活源自功能失去性变异，提高了肿瘤易感性，在肿瘤的发生、发展过程中起着更大的作用。本研究以两个与肝癌高度相关的候选抑癌基因-XPO4及BIN1为研究对象，分别检测了它们在肝癌中的表达情况并初步探讨了BIN1在肝癌中的作用机制。
本研究分为两个部分：
㈠XPO4在肝癌中表达的研究。
XPO4是核转运蛋白家族的成员，在胞核和胞浆中穿梭，负责蛋白质的运输。2008年，Zender等人用RNAi技术筛选肝癌抑癌基因时发现了XPO4，敲除XPO4可致小鼠发生肝癌。体外研究发现，在XPO4缺失表达的肝癌细胞系SK-hep1中转入XPO4会出现细胞增殖抑制。这表明，XPO4可能是与肝癌相关的新的抑癌基因。本课题旨在研究XPO4在临床标本中的表达情况并分析其与临床病理参数及预后的关系，提供其作为抑癌基因的证据。结果：
⑴q RT-PCR及免疫细胞化学检测发现与肝正常细胞系LO2相比，XPO4在肝癌细胞系BEL-7402，Hep-G2，SK-hep1中有表达的下调。
⑵qRT-PCR检测XPO4在45例肝癌及配对癌旁组织中的表达情况，在多数标本中，XPO4在癌旁组织的表达高于在癌组织中的表达(p=0.004)。
⑶免疫组化检测了123例石蜡包埋组织中XPO4的表达情况，XPO4蛋白主要表达在胞浆，相比较肝癌组织的多数缺失表达，癌旁的肝组织表达通常为阳性；XPO4蛋白表达水平与肿瘤的病理分级(p=0.004)及肿瘤大小(p=0.045)相关；生存分析表明XPO4表达缺失往往提示恶性预后(p=0.008)；XPO4表达缺失可作为肝癌患者独立的不良预后因素。
㈡BIN1在肝癌中表达及功能的初步研究。
8IN1是癌基因MYC的一个拮抗因子，可通过与其作用抑制细胞的恶性转化。BIN1基因缺失能加速ras诱导小鼠恶性肿瘤的形成，同时肿瘤细胞显示出更强的增殖、克隆形成及迁移能力。这些结果提示了BIN1具有抑癌基因的作用。此部分旨在检测BIN1在原发性肝癌中的表达情况，分析其与临床病理参数及预后的关系，并通过研究BIN1基因过表达之后对肝癌细胞生物学行为的影响，进一步探讨其在肝癌中发挥作用的机制。结果：
⑴qRT-PCR检测发现与肝正常细胞系LO2相对比，BIN1在肝癌细胞系中均有表达的下调；在42例配对组织中，BIN1在癌旁组织的表达高于在癌组织中的表达(p=0.004)。
⑵免疫组化检测了117例石蜡包埋组织，BIN1蛋白主要表达在胞浆，相对于癌组织的多数缺失表达，癌旁的肝组织表达通常为阳性；且与肿瘤的病理分级(p=0.011)及肿瘤大小(p=0.035)相关；生存分析表明BIN表达缺失往往提示恶性预后(p=0.003)；BIN1表达缺失可作为肝癌患者独立的不良预后因素。
⑶Western Blot检测到BIN1在肝癌细胞系中都有表达的下调；而在6例配对组织中，BIN1在癌旁肝组织的表达均高于癌组织的表达。
⑷将BIN1转入低内源性BIN1表达的Huh7及Hep-3B细胞后进行一系列生物学特性的研究，发现BIN1可抑制细胞增殖，降低迁移及侵袭能力，具有抑癌基因的特性。