【摘 要】
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本课题构建FasL真核表达质粒载体,通过体外转染供体小鼠骨髓源树突状细胞,探讨诱导T淋巴细胞凋亡的机理。研究经FasL转染的供体来源的树突状细胞在小鼠心脏移植中对移植物的
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本课题构建FasL真核表达质粒载体,通过体外转染供体小鼠骨髓源树突状细胞,探讨诱导T淋巴细胞凋亡的机理。研究经FasL转染的供体来源的树突状细胞在小鼠心脏移植中对移植物的保护作用机制。并为进一步研究FasL基因在移植排斥中的保护作用打下基础。 第一部分 FasL基因真核表达载体的构建 目的 构建携带小鼠FasL基因的真核表达载体,为进一步基因转染树突状细胞(Dendritic cell,DC)做准备。方法 采用限制性内切酶NheI、NotI双酶切P43-FasL质粒,将C57小鼠FasL基因切下后,与经同样双酶切的质粒载体pTracer连接,连接产物在DH5α大肠杆菌中扩增,提取重组质粒进行酶切鉴定,并对阳性克隆的基因进行测序。结果 酶切鉴定FasL基因成功正向插入pTracer质粒载体,经测序,克隆的基因与Genbank提供的C57小鼠FasL基因序列完全相同。结论 以双酶切法成功构建pTracer质粒为骨架的小鼠FasL真核表达载体,为深入研究FasL生物学功能奠定基础。 第二部分 FasL转染小鼠树突状细胞体外诱导T淋巴细胞凋亡的实验研究
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