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艾滋病严重危害着全人类的健康,从而使科研人员义无反顾地投入到艾滋病防治的研究中,虽然取得了一定的成果,但仍然不能根治艾滋病,因此我们仍需进一步研究艾滋病的发病机制进而为新药物的开发提供新的理论依据。截至2011年年底,估计中国现存活下来的艾滋病病毒感染者以及艾滋病患者共78万人,其中女性占28.6%；艾滋病病人15.4万人；全人群感染率为0.058%。估计2011年当年中国新发艾滋病病毒感染者为4.8万人,2011年艾滋病相关死亡为2.8万人。HIV-1病毒包膜蛋白gp120在病毒感染中起着重要的作用。在病毒进入细胞的过程中,gp120先和CD4分子结合,发生构象改变,使病毒包膜和细胞膜融合而感染细胞。TAT蛋白作为一个反式激活作用因子,在HIV基因复制过程中起重要作用,其基本区和核心区在反式激活作用中起关键作用。HIV感染主要攻击的靶细胞是CD4+T细胞,而且HIV主要结构蛋白(gp120)以及主要调节蛋白(tat)对CD4+T细胞的数量以及功能的影响已经研究的较为透彻。近几年,外周树突状细胞(pDC)和HIV之间的相互关系越来越受到研究者的重视。pDC在抗病毒感染的免疫反应中有重要的作用,是1型干扰素主要的生产者,这些因子在一定范围内有着潜在的抗病毒能力,而且还能够调节在抗病毒细菌的天然免疫和获得性免疫中很多细胞亚群的功能[1]。pDC还能产生其它一些细胞因子：如IL-6, TNF-α, IP-10等,这些细胞因子在抗病毒,调节机体免疫反应中都有重要作用。同时,DC还可以通过其表达丰富的共刺激分(CD80/B7-1CD86/B7-2、CD40、CD40L等)为T细胞活化提供所必须的第二信号,从而启动了免疫应答。此外pDC通过产生1型干扰素进而使NK细胞杀伤活性增强。HIV感染导致循环的pDCs数量减少[2-3]。循环的pDCs数量水平和血浆中的病毒载量呈负相关,和CD4T细胞数呈正相关[3-4],通过抗病毒治疗可使pDCs的数量以及功能有所改善[5]。HIV感染后,pDCs数量和能力改变的潜在原因还不是很清楚。Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)主要表达于树突状细胞(Dendritic cells, DCs)和巨噬细胞表面,是一类重要的模式识别受体(Patternrecognition receptors, PRRs)能够选择性地识别病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecularpatterns, PAMPs),是机体免疫系统对抗病原体入侵的首道屏障。TLR在天然免疫应答中扮演重要的角色,能够很好的控制炎症反应的性质、持续时间以及强度。研究报道pDC主要表达TLR9受体,TLR9受体对pDC的功能有重要的调节作用[6-7],当TLR9受到相关刺激物后(CpG-A),可以使pDC干扰素以及其他一些细胞因子(IL-6、TNF-α IP-10)表达增加,此外还可以使pDC表面的共刺激分子和MHCⅡ类分子表达的增高,进而促进DC的成熟,指导抗原引起的特异性免疫应答尤其是Th1型反应的产生,进而对获得性免疫应答的强度以及类型进行调解,成为连接固有免疫应答和获得性免疫应答的桥梁。目前,HIV-1主要结构蛋白(gp120)以及以及主要调节蛋白(Tat)对CD4+T细胞影响的研究较为透彻,但这些蛋白是否影响和调节DC的分化和成熟目前还不是很清楚,现有的文献报道还是很少,因此了解HIV的两种重要蛋白(Tat,gp120)对pDCs功能的影响可以初步了解pDC可能在HIV免疫受损的过程中发挥重要的作用。本文主要是首先分离纯化出pDCs,用CpG-A刺激后,然后在有或没有gp120,以及Tat的情况下分析两者之间pDCs分泌的细胞因子,表达的CD分子,以及NK细胞杀伤活性的区别,可以初步了解pDC可能在HIV免疫受损的过程中发挥重要的作用。。Gp120/tat抑制TLR-9介导的外周树突状细胞的激活目的：了解gp120/tat对TLR-9介导的pDCs的功能的影响。初步了解pDCs和HIV的相互作用机制,从而明确pDCs在HIV发病机制中的作用。方法：从健康人的外周血中用淋巴分离液分离出PBMC,然后用BDCA-4磁珠分选出Pdc,用BDCA-2抗体进行标记,流式分析其纯度。纯度鉴定后,对实验进行如下分组①CpG-A②tat③gp120④tat+CpG-A⑤gp120+CpG-⑥空白对照,每组刺激18小时,收集上清用Elisa检测IFN-α、IFN-β、IL-6、TNF-α、IP-10,此外在检(?)(?)lFN-α、IFN-β时,我们还增添了PBMC作为对照。收集细胞,用相关抗体进行标记,流式分析CD40CD54CD80CD86的表达。另外在培养液当中加入NK细胞以及其敏感的靶细胞K562,用LDH法检测NK细胞杀伤活性。结果：(1)pDC的分离：从健康志愿者的外周血中分离出PBMC,用BDCA-4抗体磁珠分选出pDC,最后用BDCA-2抗体标记流式分析pDC的纯度。分离之前pDC的纯度为0.41%,分离之后pDC的纯度85.11%(2) CpGA能够显著刺激pDC干扰素的表达,且pDC的表达量明显高于PBMC, gp120, tat能够显著抑制CpGA诱导的这一活性。P<0.05CpGA和CpG-A+gp120, CpGA和CpG-A+tat(3) CpGA能够显著刺激pDC促炎症因子的表达,gp120, tat能够显著抑制CpGA诱导的这一活性。P<0.05CpGA和CpG-A+gp120, CpGA和CpG-A+tat(4) CpGA能够显著刺激pDC的CD分子的表达,gp120,tat能够显著抑(?)CpGA诱导的这一活性。P<0.05CpGA和CpG-A+gp120, CpGA和CpG-A+tat(5) CpGA能够显著刺激pDC诱导的NK细胞杀伤活性,gpl20, tat能够显著抑制CpGA诱导的这一活性。P<0.05CpGA和CpG-A+gp120, CpGA和CpG-A+tat结论：(1)CpG-A可以诱导TLR9介导的树突状细胞的活化,包括干扰素,其他细胞因子(IL-6, TNF-a以及IP-10),CD80,86,40,54等分子表达上调,NK细胞杀伤活性增强。(2)Tat和gp120可以抑制CpG-A诱导的TLR9介导的树突状细胞的活化,从而使树突状细胞功能受损,进而使患者免疫功能受损。