目的：研究基因工程重组西妥昔单抗(Cetuximab)质量控制方法，为质最标准的制定提供科学依据。 西妥昔单抗(Cetuximab)是一种重组人鼠嵌合型单克隆抗体，主要通过干扰癌细胞表面的表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白质生长，通过抑制表皮生长因子受体，减少癌细胞进入正常组织的几率，控制癌细胞的转移，达到抗癌目的，它是迄今第一个获得批准治疗结肠癌的单克隆抗体药物。由Imclone、Bristol-Myerssguilb 公司开发的西妥昔单抗 (商品名为Erbitux)，FDA 2004年2月批准为晚期直、结肠癌三线用药。迄今为止，国内尚无西妥昔单抗的系统研究，本课题旨在研究基因工程重组西妥昔单抗(Cetuximab)质量控质方法。 方法：本课题根据《中国生物制品规程》2000年版、《中华人民共和国药典》2005年版3部以及《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》、《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》的规定和要求，结合单克隆抗体类药物的特点，主要采用RP-HPLC和ELISA方法，对西妥昔单抗的理化性质及质量控制方面着重从以下几个方面进行了研究，为新药质量标准的制定提供了依据。国内目前还没有同类单克隆抗体药物，因此研究内容均未见报道。 Cetuximab成品中由于制剂配方含有甘氨酸、甘露醇和吐温80保护剂，用经典Lowry法测定Cetuximab 成品蛋白浓度时会产生较强的干扰。本文采用三氯乙酸和脱氧胆酸钠先沉淀蛋白质，以排除制剂配方的干扰，建立了测定Cetuximab蛋白含量的TCA-Lowry沉淀法，并进行了方法学研究。采用RP-HPLC法分析Cetuximab肽谱，用胰蛋白酶酶切Cetuximab，以Sephasil peptide C<,18>(4.6mm×250mm) 为色谱柱，以0.1％(v/v) TFA/水-0.08％(v/v)TFA/乙腈为流动相，梯度洗脱，用RP-HPLC分析裂解片段，以考察产品与标准品之间同质性以及不同批次之间产品的同一性。 建立了间接ELISA测定Cetuximab抗体含量的方法，利用Cetuximab可与表皮生长因子受体(EGFR)特异性结合，采用EGFR包被酶标板作为固相抗原，加入待测Cetuximab后再加入HRP-anti Human IgG FC，用四甲基联苯胺(TMB)显色，酶联仪测定450nm吸收值，以Erbitux为标准品，以标准品OD吸收值对Erbimx浓度的对数作标准曲线，以样品OD吸收值在标准曲线上读出待测样品中Cetuximab抗体含量，并进行了方法学研究，用于检测培养液中抗体的表达水平。 建立了检测Cetuximab抗体亲和常数的非竞争ELISA法，经确定最佳EGFR包被浓度范围、最佳Cetuximab抗体浓度，得到不同浓度EGFR包板条件下与Cetuximab抗体结合反应曲线，计算Cetuximab抗体的亲和常数。用于筛选有高亲和力抗体的阳性克隆株，并考察Cetuximab单克隆抗体的亲和常数，从而建立产品Cetuximab相关的质量标准。 对Cetuximab 抗体的杂质进行研究，采用地高辛苷配基标记DNA检测法测定Cetuximab样品的CHO宿主细胞的残余DNA含量，采用ELISA法测定Cetuximab样品中的宿主蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量。 结论：建立的质量控制方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点，可用于基因工程重组西妥昔单抗(Cetuximab)产品的常规检定。