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目的:水蛭冻干粉是一种经冷冻干燥得到的新型炮制品。本研究确立了水蛭冻干粉的生产工艺,建立水蛭聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）鉴别体系,研究了水蛭冻干粉的急性毒性和对急性血瘀证大鼠的治疗作用,建立了水蛭冻干粉质量标准,最终可通过生产工艺-毒理学-药效学-质量标准全面地对水蛭冻干粉进行质量控制,保证了其质量和用药安全,为其生产和应用提供科学依据。方法:1、通过差式扫描量热仪确定水蛭冻干工艺的预冻温度及升华干燥温度;对工艺中的预冻时间、工作压力、干燥时间、解析干燥终点温度等参数利用单因素试验和L9（3~4）正交试验进行优化,确定水蛭冻干粉生产工艺的最佳参数。按照已建立的生产工艺平行制备3批实验室小试样品,并考察其性状、冻干率、抗凝血酶活性。2、构建水蛭PCR鉴别体系:分别为宽体金线蛭、日本医蛭、尖细金线蛭设计特异性引物,对其进行PCR条件优化,对7个不同品种水蛭的DNA模板进行扩增,考察引物的特异性;通过稳定性试验、灵敏度试验、专属性试验对PCR条件进行方法学验证。3、通过最大给药量试验考察水蛭冻干粉的急性毒性,并考察其对急性血瘀证大鼠的凝血功能、血液流变学、血小板指标、氧化应激水平等指标的影响以评价其治疗效果。4、通过性状、薄层色谱法和PCR法鉴别水蛭冻干粉,通过测定其中水分、总灰分等检查项、抗凝血酶活性以控制水蛭冻干粉质量,并建立质量标准。结果:1、水蛭冻干粉最佳工艺:预冻6 h（-20℃）,升华干燥9 h（20 Pa,-5℃）,解析干燥10 h（20 Pa,以5℃/h的速度从-5℃升温至45℃）,保温干燥2 h（20 Pa,45℃）,完整冻干周期为27 h。实验室小试产品颜色均匀,骨架完好,冻干率在96.4%～97.1%之间,抗凝血酶活性为30 U/g（宽体金线蛭冻干粉）、220 U/g（日本医蛭冻干粉）,不同批次样品测定结果稳定。2、宽体金线蛭、日本医蛭、尖细金线蛭的引物序列分别为WP5’-GAGGCTA CCAACCTGAACGATTA,WP3’-AGCCGAAGACCTAAATCCATGAG、HN5’-G CCGGGGTTTGGAGCAATTTCA,HN3’-TCGCCGTGGTATTCCTCTTAGCC、W A5’-GCCCCCGAACGGAACCCTCTCC,WA3’-TGCCATCGCAGCTGGTAGCC A,退火温度分别为60℃、61℃、59℃,目标条带长度分别为1000～2000 bp、1000～2000 bp、3000 bp;3对引物分别能使对应的水蛭品种与其他2种中药水蛭及4种非药典水蛭品种进行区分,特异性强;多批次的水蛭样品在同一PCR条件下能稳定扩增出相似、明亮的条带,稳定性好;3对引物的检测限分别为0.1 ng、1 ng、10 ng,灵敏度高;3对引物分别能够准确鉴别以不同比例混合的水蛭样品,专属性强。3、急性毒性试验中,宽体金线蛭冻干粉和日本医蛭冻干粉给药剂量分别达到临床成人安全剂量的56和68倍时均未出现急性毒性现象,说明水蛭冻干粉无急性中毒的危险性。对急性血瘀证大鼠作用的研究中,水蛭冻干粉组能够延长血浆的PT、APTT、TT值,降低WBV和PV水平,降低血清中TXB 2、GPIIb/IIIa、CD62p、v WF的含量,增加血浆中SOD和GSH-Px的含量,降低MDA的含量,能改善心、肺炎性细胞浸润、纤维增生等病理损伤,其中日本医蛭冻干粉对急性血瘀证大鼠的治疗作用明显优于宽体金线蛭冻干粉,水蛭冻干粉的治疗作用明显优于水蛭药材。4、水蛭冻干粉质量标准研究中,PCR体系可用于水蛭冻干粉的鉴别;确立水蛭冻干粉水分、总灰分、酸不溶性灰分分别不得过4.0%、8.0%、2.0%,酸碱度应在5.0～7.5范围内,铅不得过10 mg/kg、镉不得过1 mg/kg、砷不得过5 mg/kg、汞不得过1 mg/kg,黄曲霉毒素B1不得超1μg,黄曲霉毒素G1、G2、B1、B2的总量不得超过3μg,抗凝血酶活性宽体金线蛭冻干粉应不低于15.0 U/g;日本医蛭冻干粉应不低于110.0 U/g。结论:通过单因素试验和正交试验建立了水蛭冻干工艺,结果显示此工艺可行,重复性好,可为水蛭冻干粉工业大生产提供参考。PCR体系可用于水蛭冻干粉的准确鉴别,方法学验证试验表明此鉴别体系稳定、可行。通过急性毒性实验证明水蛭经冷冻干燥制成冻干粉后无急性中毒的危险性,通过初步药效学实验证实水蛭冻干粉对急性血瘀证的治疗作用明显优于水蛭药材,表明冷冻干燥这一新型炮制方法应用于水蛭具有显著的优越性。建立的水蛭冻干粉质量标准可用于其质量控制,保证了用药的安全性、有效性、合理性。最终可通过生产工艺-毒理学-药效学-质量标准全面地对水蛭冻干粉进行质量控制,可为水蛭冻干粉的生产提供一定科学依据,为其应用提供研究思路。