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输血传播病毒(Transfusion transmitted virus, TTV)是一种小的,无囊膜的,单股环状负链的人畜共患DNA病毒,TTV的发现是于1997年底由NiShizawa运用代表性差异分析技术(Representational difference analysis)从一名非甲一庚型肝炎病人的血清中克隆得到的病毒DNA片段,随后,人们在非灵长类以及猪、牛、羊、犬,猫、家禽等多种家养及野生动物体内也发现了TTV的感染。猪源TTV (TTSuVs)在世界范围内广泛检出,引起人们的极大关注。目前TTSuVs的诊断主要依赖DNA的检测,由于猪源TTV具有潜在的危害,因此对其抗原性进行分析是非常必要的。本实验利用基因重组技术将TTSuV2ORF2基因克隆至原核表达系统中,制备获得了具有生物学活性的重组Cap蛋白,并进行了免疫原性研究,主要研究内容如下：1、为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(TTSuVs)的感染情况,本研究采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测。结果表明,TTSuVs的两个种TTSuV1和TTSuV26(?)阳性检出率分别为54.72%和35.22%,二者的共感染率为29.56%,说明TTSuVs在广东猪群中有较为广泛的传播。挑选Nest-PCR检测TTSuV1和TTSuV2为阳性的样品,分别在病毒保守区设计引物,扩增病毒基因,并对比分析通过PCR扩增获得的TTSuVs结构蛋白编码区ORF1与NCBI上其它已发表的不同属种TTVsORF1序列的进化关系和同源性。结果表明猪TTV与人、犬、猫、猴的TTVs处在进化树的不同分枝,具有很大差异；本次研究获得的TTSuV1ORF1序列与国内多株已发表的TTSuV1ORF1序列同源性为72%-75%；获得的TTSuV2ORF1序列与现有测序的多株TTSuV2的ORF1序列同源性为88%-97%。2、以本实验室保存的TTSuV2-GDIMA1为模板设计引物,进行ORF1序列的PCR扩增、克隆及测序。通过对TTSuV2ORF1蛋白的抗原性,信号肽,跨膜区,亲疏水性和二级结构进行预测分析,将TTSuV2ORF1截短成VP1、VP2两个片段,分别将这两片段连入pET-21b载体并通过大肠杆菌系统进行表达。通过蛋白纯化,切胶回收获得高纯度的目的蛋白。以获得的高纯度ORF1-VP1与ORF1-VP2蛋白为抗原,以血清样品中经Nest-PCR检测TTSuV2呈阳性的样品进行Western Blot检测。结果显示ORF1-VP1与ORF1-VP2的表达产物均为包涵体。Western Blot结果证实,猪对TTSuV2的感染的确产生了抗TTSuV2ORF1的IgG抗体,且两段蛋白均具有抗原性。本研究对TTSuV2ORF1蛋白的生物信息学特性进行了一定的探索,有利于监测TTSuV2的进化情况,为深入研究该病毒的遗传变异和蛋白质功能奠定一定的生物学基础。3、为了分析和筛选TTSuV2ORF1抗原性较好的区域,本试验将通过大肠杆菌表达系统表达出的TTSuV2ORF1-VP1和VP2重组蛋白纯化后作为间接ELISA检测方法的抗原,与Nest-PCR共同检测213份猪血清中抗TTSu V2的IgG抗体和病毒DNA。结果显示Nest-PCR检测呈阴性的部分样本,通过血清学检测呈现出较高抗体水平；而Nest-PCR检测呈阳性的部分血清样品,其抗体水平却相对较低。TTSuV2ORF1-VP1蛋白和VP2蛋白均具有良好反应原性,实验结果预示其中可能存在中和位点。用商品化的ELISA试剂盒检测相同血清中CSFV、PRRSV、PRV、HCV的阳性率分别为84.44%、86.22%、45.33%、68.42%。本试验为进一步研究TTSuV2ORF1抗原表位奠定了基础。