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目的:检测鸦胆子油乳对人宫颈癌Caski细胞体外增殖、凋亡及对细胞内HPV16E6、E7mRNA表达的影响,探讨鸦胆子油乳体外对宫颈癌细胞增殖的抑制作用及可能作用机制,为鸦胆子油乳用于宫颈癌治疗提供实验依据,为宫颈癌的综合治疗提供新的思路。
方法:
1.通过体外培养人宫颈癌Caski细胞,倒置显微镜下观察该细胞经不同浓度鸦胆子油乳作用下引起的形态学变化。
2.应用MTT法检测鸦胆子油乳对人宫颈癌Caski细胞体外生长的影响。
3.采用流式细胞术AnnexinV-FITC法测定鸦胆子油乳对人宫颈癌Caski细胞凋亡率的影响。
4.不同浓度的鸦胆子油乳作用72小时后提取人宫颈癌Caski细胞总RNA进行RT-PCR,检测鸦胆子油乳对人宫颈癌Caski细胞内HPV16E6、E7的mRNA表达量的影响。
结果:
1.倒置显微镜下可见经鸦胆子油乳体外作用后的人宫颈癌Caski细胞形态发生改变,数量减少,部分细胞出现皱缩,颗粒增多,并可见细胞碎片。
2.鸦胆子油乳能有效抑制人宫颈癌Caski细胞的生长。经0、5、10、20、40、80μg/ml的鸦胆子油乳分别作用24小时后细胞生长抑制率的差异无统计学意义;作用48小时后细胞生长抑制率分别为41.45%,42.60%,71.48%,84.21%,97.84%,98.82%,差异有统计学意义;作用72小时后细胞生长抑制率分别为52.38%,69.11%,81.93%,93.76%,97.91%,98.42%,差异有统计学意义。同时从上述数据可见,同一时间随着药物浓度升高,细胞生长抑制率也升高。故随着作用时间延长和浓度的增加,鸦胆子油乳对细胞的生长抑制率也增大。
3.流式细胞术AnnexinV-FITC法检测结果提示鸦胆子油乳能诱导人宫颈癌Caski细胞发生凋亡。经0、5、10、20μg/ml的鸦胆子油乳作用人宫颈癌Caski细胞72小时的凋亡率分别为4.16±1.56%、11.32±3.78%、12.65±2.00%、27.53±7.04%,除浓度为5μg/ml组外,其余组与空白对照组的差异均有统计学意义,且随浓度增高凋亡率逐渐增加。
4.鸦胆子油乳对人宫颈癌Caski细胞HPV16E6mRNA的表达有降调节作用。经0、5、10、20μg/ml的鸦胆子油乳作用72h后,HPV16E6mRNA的表达出现下降趋势,与对照组差异有统计学意义。不同浓度鸦胆子油乳对人富颈癌Caski细胞HPV16E7mRNA的表达,差异无统计学意义。
结论:
1.通过体外培养人宫颈癌Caski细胞,经鸦胆子油乳处理后,细胞生长受到抑制,而这种抑制作用呈一定的时间和浓度依赖性。
2.鸦胆子油乳能诱导人富颈癌Caski细胞凋亡的发生,且随着药物浓度增高凋亡率增加。
3.鸦胆子油乳对人宫颈癌Caski细胞HPV16E6有降调节作用,对HPV16E7mRNA的表达无影响。
4.鸦胆子油乳在体外对人宫颈癌Caski细胞的生长抑制及诱导凋亡发生的作用,可能与其下调人宫颈癌Caski细胞HPV16E6基因的表达有关,通过抑制HPV16E6表达,激活p53通路,促进病变细胞衰老和凋亡,从而达到抑制宫颈癌细胞生长的作用。