研究背景:miRNAs是一类内源性非编码的小分子单链RNA,大小约19-25nt,调节细胞的各种基本生物学过程。它调节基因表达主要是通过结合3’非编码区(UTR),导致miRNA降解或翻译受阻。miRNAs在不同类型肿瘤的发生发展中扮演着不同角色,miR-143是一种常见的抑癌基因,为了证实miR-143在喉癌中的作用,将miR-143模拟物转染至Hep-2细胞中,观察其对Hep-2细胞生物学的影响以及作用机制。方法:本实验分为三组:实验组(转染miR-143-mimics),对照组(转染无意义寡聚核苷酸序列)及空白组。首先人工合成miR-143模拟物及Negative control(由上海吉玛公司合成),使用Lipofectamine?2000脂质体将其瞬时转染至Hep-2细胞中,而空白组为Opti-MEM?I低血清培养基培养的细胞,不转染任何序列。在荧光显微镜下观察细胞的转染效率,之后使用MTT、流式细胞仪检测细胞的生长及凋亡情况。基因预测软件发现HK-2可能是miR-143的一个靶基因,最后采用RT-PCR及Western blot试验检测miR-143对靶基因HK-2的m RNA及蛋白表达水平。结果:1、荧光显微镜下观察细胞的转染效率>90%。2、MTT结果显示,转染miR-143-mimics的细胞增殖速度减慢,其细胞存活率在0、24、48、72h分别是(98.8±2.82)%,(89.2±2.14)%,(80.3±1.98)%,(76.7±1.26)%,与另外两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3、流式细胞结果发现转染miR-143-mimics的细胞的总凋亡率显著增加,三组细胞的凋亡率分别是(11.86±1.12)%,(3.24±0.63)%,(3.21±0.32)%,且差异有统计学意义(P<0.05)。4、RT-PCR结果显示,空白组、NC组及转染miR-143-mimics组中HK-2基因的表达量分别是(5.09±1.49),(4.99±1.17),(1.03±0.03),与另外两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。5、Western blot结果显示,空白组、NC组及miR-143-mimics组的HK-2蛋白的表达量分别是(0.57±0.03)、(0.56±0.03)和(0.26±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、miR-143可以抑制Hep-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡;2、miR-143可能通过调节HK-2的表达来影响Hep-2细胞的生物学行为。