副鸡嗜血杆菌病是由副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum, Hpg)感染引起的疾病，又被称为鸡传染性鼻炎。该病是危害养鸡业重要的细菌病之一，能够给养鸡业带来巨大的经济损失。本研究分离鉴定1株副鸡嗜血杆菌；优化了副鸡嗜血杆菌培养基配方；并运用该配方进行高密度发酵工艺研究并应用于生产。为我国的副鸡嗜血杆菌病疫苗生产打下了基础，其主要研究内容如下。1.副鸡嗜血杆菌HB株分离鉴定及其血凝素基因遗传进化分析从湖北荆门某养鸡场采集鸡鼻窦深部黏液，分离到1株细菌。对其进行细菌培养特性、革兰氏染色镜检、生化试验、药敏试验、血清型分析、回归试验、攻毒保护试验等常规性鉴定，同时进行聚合酶链反应（PCR）、PCR产物测序，并将测序结果与已知副鸡嗜血杆菌基因组序列进行比对分析。生化试验结果为硝酸盐还原，葡萄糖、氧化酶、蔗糖、生长需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸阳性，海藻糖、硫化氢、过氧化物酶阴性。湖北（HB）株与已知发表副鸡嗜血杆菌基因序列同源性在98%～100%之间。因此鉴定该分离株为副鸡嗜血杆菌。从该分离株中PCR扩增副鸡嗜血杆菌血凝素基因，并将扩增到的PCR产物测序，将测序结果与已报道副鸡嗜血杆菌血凝素基因进行遗传进化比对分析。结果显示扩增到的血凝素基因片段大小为1038bp。遗传进化分析表明湖北（HB）分离株与Tianjin、Sd-1同源性最近，同源性达100%；与hagA、SA-3、E-3C、0083、HP8、221最低，同源性在96.0%～96.1%之间。2.副鸡嗜血杆菌HB株摇瓶培养优化实验副鸡嗜血杆菌由于自身特点，在正常培养过程中，往往体现出增值能力不强，最终浓度不高的情况。由于添加营养物质丰富，培养后期较其他产品更容易出现污染的现象。目前，鸡传染性鼻炎疫苗培养基效果并不是非常理想，增菌效果并不能较好的达到生产要求。此次研究中，优化出各个单因素的最佳配比量，为规模化生产提供较为优质的培养基配方，并得到以下结论：由生长曲线可以得出，本菌在培养4h左右OD值迅速增大，生长活跃进入对数增长期；在14h左右达到培养的峰值阶段；在18～20h左右OD值开始逐渐下降。对添加不同动物血清，添加不同含量血清，添加不同浓度葡萄糖，添加不同含量的辅酶4个方面进行培养比较可以得出：添加鸡血清5%（V/V），葡萄糖添加量1g/L，0.1%辅酶水溶液添加量1%（V/V），培养的菌液吸光度OD值最高，稳定期持续时间较长。3.副鸡嗜血杆菌HB株大规模高密度发酵培养工艺优化及应用高品质的鸡传染性鼻炎疫苗对于此病的预防尤为关键。细菌的液体发酵是目前比较好的规模化培养细菌的模式。但是国内对于副鸡嗜血杆菌发酵工艺的研究较少，本试验旨在对本菌的高密度发酵关键工艺指标进行探索，进而对实际生产工作提供较好的参考。分别以10L和200L发酵罐采用分批发酵方式培养副鸡嗜血杆菌HB株。通过对接种量、培养温度和pH值三个发酵参数的分组实验，最后得到以下结论，副鸡嗜血杆菌HB株在试验二优化培养基基础上，控制接种量5%（V/V）、培养温度37.5℃、pH值为7.2，培养的菌体活菌计数及吸光度OD值最高，应用至200L中试发酵罐，取得了菌体密度OD值及活菌数目分别为15.4、3.18x10~9CFU/ml的较理想的结果。对规模化高密度发酵副鸡嗜血杆菌提供有益的参考。