为了延长胸腺素α1（Thymosin alpha 1,Tα1）在体内的作用时间、提高生物利用度,对其进行了生物大分子修饰,并通过活性、构象及体内代谢研究,系统地阐明大分子修饰对肽类药物的影响,为进一步开展肽类药物的大分子修饰研究提供理论基础。 大分子修饰位点的选择及定点修饰的实现是课题设计的重点内容。肽类化合物的二级构象对其发挥生物活性意义重大,因此本课题依据Tα1二级构象的特点,分别在Tα1的N-末端、C-末端、β-转角区域、α-螺旋区域及无规卷曲区域选择了位点进行修饰。以半胱氨酸替换选择位点的氨基酸,合成一系列Tα1类似物,然后将mPEG₅₀₀₀-MAL与该类似物进行偶联,实现大分子在Tα1上的定点修饰。现将本课题完成的工作简要总结如下: 1.应用固相肽合成法,合成[Cys^x]Tα1 9个（其中2个本课题组前期工作中已设计合成）。经RP-HPLC或Flash纯化,纯度>85%,质谱鉴定实测分子量与理论分子量相符。 2.mPEG₅₀₀₀-MAL与[Cys^x]Tα1偶联,合成[Cys^x(mPEG₅₀₀₀-MAL)]Tα1（x代表修饰位点）9个。经RP-HPLC纯化,MALDI-TOF-MS鉴定在8000左右有一组峰,相邻两峰分子量相差约44,具有聚乙二醇的典型结构特征。 3.初步体外活性评价结果表明,除TC8、TC24、PT8外,其它化合物对小鼠脾细胞在ConA刺激下IFN-γ的产生均有明显促进作用,化合物TC17、TC、CT、TCP、PCT生物活性高于阳性对照药Tα1或与其相当。另外,除CT、TC16、TC24、PT24外,其余化合物均有明显增强ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应的作用,并且除PCT外,活性均较Tα1有增加趋势。 24-位经氨基酸替换后活性消失,而经大分子修饰后又具有生物活性;若[Cys^x(mPEG₅₀₀₀-MAL)]Tα1具有生物活性,相应的[Cys^x]Tα1均具有活性;8-位较特殊,大分子修饰前后均无活性。由此可以得出结论,某些位点对肽生物活性的发挥起决定作用,但大分子对肽生物活性的发挥无显著影响。 体内代谢评价结果表明,[Cys^x]Tα1的体内代谢行为与Tα1类似,[Cys^x]Tα1经mPEG₅₀₀₀-MAL修饰,修饰位点决定大分子修饰对肽体内代谢行为的影响。N-末端、C-末端、5-位修饰对化合物的体内代谢行为无影响,其它位点的修饰均显著延长体内代谢时间,药时曲线下面积（AUC）较Tα1增加8～20倍,而且在给