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桫椤科(Cytheaceae)是树形蕨类植物(Tree ferns)，这个科是非常特别的植物类群，是植物界的“活化石”，它们对研究植物的起源、进化和地理区系等方面十分重要，也是极为珍贵的。笔筒树(Sphaeropteris lepifera(Hook. R.M.Tryon)属于桫椤科，树形蕨，树形高大，有巨大的伞状树冠，是蕨类植物中罕见的大型园艺观赏植物。笔筒树数量稀少，生境较为暴露，易受破坏，近年来，又出现成活率低、幼苗数量减少等问题，因此为了解决笔筒树繁殖障碍，需要研究其生殖机制。
DNA甲基化是基因组DNA的重要表观遗传方式，可以调控植物体的细胞分化、基因表达、个体发育及对各类生物因素和非生物因素的环境胁迫的响应。5-氮杂胞苷(5-azaC)是一种甲基化抑制剂，它能够嵌入到DNA中与甲基转移酶结合，并使其隔离，进而抑制甲基化状态的维持。因此，采用5-azaC对笔筒树的幼配子体进行处理，来探究笔筒树性别分化与DNA甲基化之间的关系。结果如下：
(1)使用5-azaC对笔筒树配子体进行处理，通过对比假根数量及形态、叶绿体发育和配子体精子器、颈卵器的数目发现：5-azaC对原叶体发育有一定的影响，部分叶绿体出现发黄坏死，有叶绿体形状的改变，小部分叶绿体出现溶解，向细胞中间聚集；假根颜色加深，弯曲的数量增加，假根数量也略微增加；5-azaC可以促进雄性配子体的分化，增加精子器的数目，增加精子器分布的区域，在浓度为100μmol/L时表现得尤为明显。
(2)5-azaC对笔筒树配子体比率也有影响，表现为：5-azaC能够提高笔筒树配子体的雄性配子体比率，对照组的雄性配子体所占比例为73％，5-azaC处理的笔筒树幼苗表现为雄性配子体分化增多，所有浓度处理均明显高于73％，而浓度为100μmol/L的5-azaC处理下的笔筒树雄性配子体可高达97.09％，雄性配子体数量是雌性配子体的100倍；而浓度为10μmol/L和1μmol/L时，雄性配子体的数量为雌性配子体的二三十倍左右，同样远高于对照组的5倍。因此，可以表明5-azaC能够促进雄性配子体的分化，而浓度为100μmol/L时促进作用最大，即100μmol/L的5-azaC在影响笔筒树配子体性别分化方面，效果最为明显。
(3)通过MSAP法分析5-azaC处理的笔筒树配子体DNACCGG甲基化的变化。结果表明：5-azaC处理笔筒树配子体，其DNA的总甲基化率略有降低，降低到56.10％；略微增高其全甲基化率，达到23.3％；降低其DNA半甲基化率至32.7％。CK在总甲基化条带数在284的情况下，单链DNA外部甲基化、DNA双链内部甲基化和双链DNA外部甲基化分别占39.8％、21％和39.2％。5-azaC处理的情况下单链DNA外部甲基化、DNA双链内部甲基化和双链DNA外部甲基化分别占32.7％、23.3％和44％。5-azaC处理能够减少单链DNA外部甲基化所占比重，增加DNA双链内部甲基化和外部甲基化所占比重；5-azaC处理的笔筒树配子体其DNA超甲基化率为2.43％，去甲基化率为52.91％，甲基化多态性比例为75.34％。得到的43条序列中有23条对比到了结果，对比发现，23条序列中有大部分与某些真菌序列类似，同源性能达到70％以上，有两条为某种蛋白。
DNA甲基化是基因组DNA的重要表观遗传方式，可以调控植物体的细胞分化、基因表达、个体发育及对各类生物因素和非生物因素的环境胁迫的响应。5-氮杂胞苷(5-azaC)是一种甲基化抑制剂，它能够嵌入到DNA中与甲基转移酶结合，并使其隔离，进而抑制甲基化状态的维持。因此，采用5-azaC对笔筒树的幼配子体进行处理，来探究笔筒树性别分化与DNA甲基化之间的关系。结果如下：
(1)使用5-azaC对笔筒树配子体进行处理，通过对比假根数量及形态、叶绿体发育和配子体精子器、颈卵器的数目发现：5-azaC对原叶体发育有一定的影响，部分叶绿体出现发黄坏死，有叶绿体形状的改变，小部分叶绿体出现溶解，向细胞中间聚集；假根颜色加深，弯曲的数量增加，假根数量也略微增加；5-azaC可以促进雄性配子体的分化，增加精子器的数目，增加精子器分布的区域，在浓度为100μmol/L时表现得尤为明显。
(2)5-azaC对笔筒树配子体比率也有影响，表现为：5-azaC能够提高笔筒树配子体的雄性配子体比率，对照组的雄性配子体所占比例为73％，5-azaC处理的笔筒树幼苗表现为雄性配子体分化增多，所有浓度处理均明显高于73％，而浓度为100μmol/L的5-azaC处理下的笔筒树雄性配子体可高达97.09％，雄性配子体数量是雌性配子体的100倍；而浓度为10μmol/L和1μmol/L时，雄性配子体的数量为雌性配子体的二三十倍左右，同样远高于对照组的5倍。因此，可以表明5-azaC能够促进雄性配子体的分化，而浓度为100μmol/L时促进作用最大，即100μmol/L的5-azaC在影响笔筒树配子体性别分化方面，效果最为明显。
(3)通过MSAP法分析5-azaC处理的笔筒树配子体DNACCGG甲基化的变化。结果表明：5-azaC处理笔筒树配子体，其DNA的总甲基化率略有降低，降低到56.10％；略微增高其全甲基化率，达到23.3％；降低其DNA半甲基化率至32.7％。CK在总甲基化条带数在284的情况下，单链DNA外部甲基化、DNA双链内部甲基化和双链DNA外部甲基化分别占39.8％、21％和39.2％。5-azaC处理的情况下单链DNA外部甲基化、DNA双链内部甲基化和双链DNA外部甲基化分别占32.7％、23.3％和44％。5-azaC处理能够减少单链DNA外部甲基化所占比重，增加DNA双链内部甲基化和外部甲基化所占比重；5-azaC处理的笔筒树配子体其DNA超甲基化率为2.43％，去甲基化率为52.91％，甲基化多态性比例为75.34％。得到的43条序列中有23条对比到了结果，对比发现，23条序列中有大部分与某些真菌序列类似，同源性能达到70％以上，有两条为某种蛋白。