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目的:研究云南元宝枫黄酮对个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)凋亡诱导作用及对凋亡相关基因p53、p21、Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响,探讨云南元宝枫黄酮抑瘤的作用机制,为进一步开发应用云南元宝枫黄酮提供实验基础。方法:1、采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同时间和不同浓度的云南元宝枫黄酮对YTMLC细胞的生长抑制作用,确定半数抑制浓度(IC50);2、通过倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜从细胞水平直接观察元宝枫黄酮作用后,YTMLC细胞的形态变化。应用流式细胞术检测元宝枫黄酮诱导后YTMLC细胞周期及其凋亡的状况;应用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA片段化情况。3、半定量RT-PCR检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞p53、p21、Bcl-2、Bax和Caspase-3基因表达的影响;4、Western-blot检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞p53、Bcl-2蛋白表达的影响。结果:1、云南元宝枫黄酮可以抑制肺癌细胞株YTMLC的增殖,其抑制作用呈时间和浓度依赖关系,作用24、48、72小时后,IC50值分别为151.24±13.16ug/ml、108.53±8.22ug/ml、70.21±9.62 ug/ml;2.经100ug/ml云南元宝枫黄酮诱导48小时,肺鳞癌YTMLC细胞在荧光显微镜和透射电镜下可见凋亡的形态学改变,核酸凝胶电泳检测:可见DNA片断化改变的“梯形”条带。流式细胞术检测结果显示元宝枫黄酮既可以诱导YTMLC细胞凋亡,也可以引起YTMLC细胞坏死。3、半定量RT-PCR结果显示:100ug/ml云南元宝枫黄酮诱导个旧肺鳞癌YTMLC细胞24、48、72小时后,凋亡相关基因p53、p21、Bax、Caspase-3的相对表达量逐渐增加,而Bcl-2基因的相对表达量逐渐减少,呈时间相关性。经元宝枫黄酮诱导48、72小时的实验组与未加药的对照组比较,p53、p21、Bax、Caspase-3基因相对表达量增加明显,而Bcl-2基因的相对表达量差异有统计学意义p<0.01。4.Western-blot结果显示:经元宝枫黄酮作用24h后,YTMLC细胞p53、Bcl-2蛋白相对表达量无明显变化;元宝枫黄酮作用48h、72h,YTMLC细胞p53、蛋白相对表达量增加,而Bcl-2相对表达量减少。结论:1、云南元宝枫黄酮在体外可抑制个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)生长。2、云南元宝枫黄酮可诱导个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)凋亡,其机制可能与其能上调凋亡基因p53、p21、Bax和Caspase-3的表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。3、云南元宝枫黄酮可能促进个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)凋亡相关蛋白p53的表达,抑制凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。