目的:分析“三穴五针法”针刺治疗哮喘患者全血miRNA与基因组m RNA表达谱变化,整合分析miRNA及其靶基因在针刺抗哮喘过程中的作用,筛选针刺抗哮喘发挥核心调控作用的miRNA及其特异性靶基因,从miRNA角度探讨针刺抗哮喘的作用机制。方法:根据哮喘控制测试评分(Asthma Control Test,ACT)、患者用药情况选择10例“三穴五针法”针刺治疗效果显著的哮喘患者外周血用于研究,提取外周血中的总RNA,分别用Agilent Human miRNA v21.0芯片和SBC Human((4×180K))ce RNA芯片检测患者针刺治疗前后miRNA和m RNA的表达谱,利用mi RWalk对筛选出的差异miRNA进行靶基因预测,与m RNA表达谱芯片联合分析,获得差异miRNA的特异性靶基因。利用Gene Ontology和KEGG数据库对差异miRNA的靶基因进行GO功能和KEGG信号通路富集分析。构建针刺抗哮喘的miRNA-m RNA调控网络,定位针刺抗哮喘中起核心调控作用的关键miRNA。基于关键miRNA构建miRNA-Gene-GO调控网络,筛选出针刺抗哮喘效应的关键调控靶基因,分析其在“三穴五针法”针刺抗哮喘过程中的作用。结果:1.依据差异表达显著性标准,筛选出“三穴五针法”针刺治疗哮喘患者在治疗前后共有22个显著差异表达miRNA和1381个显著差异表达的m RNA;2.miRNA靶基因预测结果显示,受miRNA调控的上调靶基因3101个,下调靶基因3869个,基于预测靶基因的生物信息学分析显示,上调靶基因主要参与代谢和刺激反应,以及体液免疫等生物过程,参与的显著性信号通路包括代谢通路、MAPK、P53、Fox O等信号通路;下调靶基因主要参与免疫反应、调节代谢过程和刺激反应等生物过程,参与的显著性信号通路包括Wnt、PI3K-Akt、T细胞受体、TNF-α等免疫、炎症信号通路,这些基因参与的生物学过程和信号转导通路在哮喘疾病中均扮演重要角色;3.miRNA芯片与m RNA芯片的联合分析显示,针刺后miRNA调控的上调特异性靶基因56个,下调特异性靶基因136个。这些特异性靶基因显著性功能主要是锌离子跨膜转运、类固醇激素的反应、磷酸蛋白磷酸酶活性调节、钙离子信号传导调节等。参与的显著性信号通路包括自然杀伤细胞介导的细胞毒性、TRP通道的炎症介质调节、磷脂酰肌醇信号系统、PI3K-Akt信号通路、p53信号通路、肌醇磷酸代谢等;4.基于miRNA-m RNA调控网络分析提示,mi R-6085、mi R-374a-5p、mi R-7975、mi R-30e-3p、mi R-6749-5p、mi R-30c-5p为针刺抗哮喘效应中发挥核心调控作用的关键miRNA;5.基于针刺抗哮喘关键miRNA构建的miRNA-Gene-GO调控网络显示,WNT10B、UBE3A、NR2F2、CCND1、PGR、CALM1、VDR、HTT、ANXA1和CLU等是针刺主要调控的靶基因。上皮细胞增殖调节、锌离子跨膜转运、ATP酶活性调节、T细胞分化调节、蛋白泛素化调节、第二信使介导的信号传导、钙离子信号传导调节、磷酸蛋白磷酸酶活性调节、对类固醇激素的反应等是针刺抗哮喘效应主要调节的生物学过程。结论:1.miRNA芯片数据分析筛选出针刺抗哮喘效应相关的22个差异表达miRNA,联合m RNA芯片分析确定192个特异性靶基因;2.对miRNA及其特异性靶基因的生物信息学分析提示mi R-6085、mi R-374a-5p、mi R-7975、mi R-30e-3p、mi R-6749-5p、mi R-30c-5p等6个miRNA在针刺抗哮喘效应中发挥核心调控作用;3.通过构建miRNA-Gene-GO调控网络显示WNT10B、UBE3A、NR2F2、CCND1、PGR、CALM1、VDR、HTT、ANXA1和CLU等是针刺抗哮喘主要调控的靶基因;4.针刺可能通过上皮细胞增殖调节、锌离子跨膜转运、ATP酶活性调节、T细胞分化调节、蛋白泛素化调节、第二信使介导的信号传导、钙离子信号传导调节、磷酸蛋白磷酸酶活性调节、对类固醇激素的反应等生物调节机制发挥抗哮喘作用。