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目的1.对比原代细胞BMSCs、ADSCs细胞增殖能力,成骨、成脂分化能力,选择合适的干细胞作为本实验的研究细胞。2.观察在成骨诱导环境下,脂肪干细胞内miR503、miR144的表达情况。3.检测Mimic-miR503、Inhibitor-miR144促进ADSCs成骨分化,Mimic-miR503、与Inhibitor-miR144联合转染对ADSCs成骨分化具有协同作用。方法提取SD大鼠原代BMSCs和ADSCs,通过显微镜下比较细胞的形态;细胞流式检测细胞表型;P3代细胞计数,检测细胞的增殖能力并绘制生长曲线;成骨诱导进行ALP染色、茜素红染色、成脂诱导行油红O染色;qRT-PCR检测成骨、成脂相关基因比较两组细胞的成骨成脂分化能力。P3代ADSCs成骨诱导组和空白对照组,利用qRT-PCR检测miR503和miR144相对表达量。miRNA数据库Target Scan(http://www.target scan.org)预测miRNA503-5p和miRNA144-5p相关作用靶点,miRNA503-5p靶向成骨基因主要包括:WNT3ɑ、ATK3、SMAAD7、WNT4,miRNA144-5p靶向成骨基因主要包括:TFG、SMAD6、SMAD5、SMAD1、WNT2、WNT5α、WNT7α、BMP10、MMP13等。体外转染Mimic-miR503(M组)、Inhibitor-miR144(I组)、Mimic-miR503和Inhibitor-miR144混合物(M+I组)、实验对照组(NC组),实现miR503的过表达和miR144低表达;细胞流式检测ADSCs的细胞表型;MTT检测四组ADSCs的增殖能力并绘制相关生长曲线;ALP染色、qRT-PCR、Western Blot检测各组的成骨标志物。结果BMSCs、ADSCs均可稳定传代至P10代,细胞形态均一,稳定;均具有成骨、成脂分化能力;细胞增殖实验显示P3代ADSCs的增殖能力强于BMSCs(P<0.05)。QRT-PCR显示:ADSCs成骨诱导组与空白对照组相比,miR503表达量升高50倍,miR144表达量降低2倍。M组、I组、M+I组分别相对于NC组,ALP染色强度较强(116.623±3.02%,117.9753±2.97%,141.2263±3.59%)。与M组、I组相比,M+I组ALP染色强度较强(25.7230±2.73%,24.5267±2.53%)。qRT-PCR检测成骨相关基因,M组、I组、和M+I组细胞中的所有成骨相关基因(RUNX2、BSP、OCN)的表达水平均明显高于NC组的表达水平,M+I组细胞中的成骨相关基因(RUNX2、BSP)的表达水平则明显高于M组和I组的表达水平,且M组与I组之间没有明显差异。结论相对于BMSCs,ADSCs具有来源广泛,增殖能力强,具有骨向分化能力,ADSCs可为本实验成骨分化的研究细胞。miR503、miR144可能参与调控ADSCs成骨分化。M+I组成骨能力强于M组、I组,转染组成骨能力都强于阴性对照NC组。Mimic-miR503活化经典Wnt/β-catenin通路、Inhibitor-miR144活化SMAD信号通路促进ADSCs骨向分化,Mimic-miR503和Inhibitor-miR144协同促进骨向分化。