通过调节MAPK信号通路探讨氧化槐果碱对大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用

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目的:观察氧化槐果碱(Oxysophocarpine,OSC)对原代培养的新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用并探讨其作用机制与MAPK信号通路的关系。  方法:1.原代培养新生大鼠海马神经元。  2.采用2-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)法酶标仪检测海马神经元存活率,采用紫外分光光度计法检测海马神经细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。  3.以激光共聚焦显微镜为工具,使用Fluo-3荧光探针检测游离的钙离子表达数目含量以及使用JC-1探针来检测原代培养海马神经元内线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)水平的变化。  4.通过实时荧光定量PCR技术检测原代培养海马神经元内IL-1β,TNF-αmRNA的表达。  5.通过免疫蛋白印迹技术检测ERK1/2,p-ERK1/2,JNK1/2,p-JNK1/2,p38和p-p38MAPK的蛋白表达。  结果:1.与正常组比较,模型组的神经元的存活率明显降低,乳酸脱氢酶的漏出率显著增加(P<0.01);与模型组比较,氧化槐果碱剂量组(0.8,2,和5μmol/L)可显著提高海马神经细胞的存活率(P<0.01),并且可显著降低乳酸脱氢酶的漏出率(P<0.01)。  2.与正常组比较,模型组海马神经元内游离的钙离子含量显著上升,线粒体膜电位荧光比值显著降低(P<0.01);与模型组比较,氧化槐果碱剂量组(0.8,2,和5μmol/L)可显著降低海马神经元内游离钙离子的含量(P<0.05,P<0.01),稳定线粒体膜电位(P<0.01)。  3.与正常组比较,模型组大鼠海马神经元内IL-1β,TNF-αmRNA的表达明显增高(P<0.01),与模型组相比,氧化槐果碱剂量组(5μmol/L)能够显著下调IL-1β,TNF-αmRNA的表达(P<0.05)。  4.与正常组相比,细胞内的ERK1/2,p-ERK1/2,JNK1/2,p-JNK1/2,p-p38和p-p38MAPK的蛋白水平明显上调(P<0.01),与模型组相比氧化槐果碱剂量组(5μmol/L)能够显著下调p-ERK1/2,p-JNK1/2,以及p-p38MAPK的蛋白水平的表达(P<0.05),然而对于细胞内的ERK1/2,JNK1/2,和p38的蛋白水平的表达无显著性差异。  结论:1.氧化槐果碱对氧糖剥夺再灌注损伤的大鼠海马神经元有保护作用。  2.氧化槐果碱对氧糖剥夺再灌注损伤的新生大鼠海马神经元的保护作用是通过改善MAPK炎性通路来实现。
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