马铃薯是世界上最重要的非谷类粮食作物,对国家的粮食安全起重要作用。病害是威胁马铃薯产量最主要的原因之一,马铃薯黄萎病（Potato verticillium wilt）是一种真菌性病害,最高可造成每公顷马铃薯产量损失5 t-12 t。在生产上,应用抗病品种是防控病害最经济有效的手段。挖掘抗病基因、开发连锁标记可加速抗病品种的选育。但到目前为止,关于马铃薯黄萎病抗病基因定位和分子标记开发的相关研究较少。本研究利用二倍体马铃薯种间杂种V67为母本,与C545杂交构建了BC₁抗性分离群体,获得的研究结果如下:1、BC₁群体表型鉴定:经过多轮盆栽接种鉴定与茎段培养相结合,获得175份表型准确的单株,其中87个为抗病后代,88个为感病后代,抗感分离比符合1:1。2、Ve基因的定位:重新选择了23个抗病单株组建抗病混合池,22个感病单株组建感病混合池,进行DNA-Seq测序分析,绘制了Δ（SNP-index）分布图,仍然将马铃薯黄萎病抗性基因定位于第五号染色体0 Mb-4.5 Mb的范围,与本课题组前期的定位结果一致。在定位区段内重新开发多态性标记,共筛选到1个CAPS标记、4个直接扩增标记、和10个SSR标记。结合前期已筛选的12个多态性标记,重新检测新的定位群体单株,利用27个多态性标记绘制出总长为24.4c M的遗传连锁图谱,标记的平均图距为0.90 c M。遗传连锁图的标记位置与其对应的染色体位置线性关系较好,说明定位结果比较可靠。距离马铃薯黄萎病抗性基因Ve最远的连锁标记为C3,将该基因定位于连锁标记C2与SSR514之间,对应的物理位置为3.95 Mb-5.71 Mb的区间范围内。进一步利用两侧连锁标记C2和SSR514筛选重组单株,从80余份材料中筛选得到7个重组单株,利用区间内的3个共分离标记检测到重组单株CV-287在标记SS171与SSR403之间发生交换,可进一步缩小定位区间。重组单株的表型和其他共分离标记的扩增结果尚需完成。3、荧光定量PCR技术分析候选区段内NBS-LRR基因的表达模式:目前定位区段内共有22个NBS-LRR结构域的候选基因,以抗/感亲本为研究对象,通过黄萎病病菌悬浮液接种并定植,于0 h（未接种对照）、4 h、18 h、3 d、7 d五个时间点分别取样进行基因表达量分析,对比分析候选基因在抗感亲本之间的表达谱差异,研究结果表明,病原接种后有5个候选基因在某一时间点在抗病亲本中超量表达,显著高于感病亲本的表达水平,可能与抗病相关,尚需在抗病和感病后代中进一步验证其表达水平。本研究工作为进一步克隆马铃薯抗黄萎病Ve基因以及利用分子标记开展辅助育种工作奠定了基础。