【摘 要】
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目的:ZFP91是具有5个锌指结构域的锌指蛋白家族成员,并且被认为是一种新型的E3泛素连接酶,在肿瘤发生中发挥着重要作用。本研究的目的在于探讨ZFP91在急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）中对细胞增殖、周期和凋亡的作用及其相关分子机制。方法:1.用Western blot和q RT-PCR检测不同AML细胞株中ZFP91的表达水平;通过慢病毒转染构建稳定敲低ZF
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目的:ZFP91是具有5个锌指结构域的锌指蛋白家族成员,并且被认为是一种新型的E3泛素连接酶,在肿瘤发生中发挥着重要作用。本研究的目的在于探讨ZFP91在急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）中对细胞增殖、周期和凋亡的作用及其相关分子机制。方法:1.用Western blot和q RT-PCR检测不同AML细胞株中ZFP91的表达水平;通过慢病毒转染构建稳定敲低ZFP91的NB4,KG1a和THP1细胞,再用Western blot和q RT-PCR验证ZFP91的敲低效率。2.运用CCK-8和细胞计数实验检测细胞增殖能力,运用流式细胞术检测周期分布;随后运用Western blot检测凋亡相关标志物（PARP,cl-PARP,BAX,Bcl-2）表达水平的改变,同时运用流式细胞术检测敲低ZFP91后NB4和KG1-a细胞株的凋亡情况。3.用Western blot和q RT-PCR检测ZFP91对RIP1表达水平的影响。4.运用CHX实验和体外泛素化实验探究ZFP91对RIP1蛋白的泛素依赖的蛋白酶体降解作用。随后进一步运用免疫共沉淀和生物信息学分析探究ZFP91与RIP1之间的相互作用。结果:1.ZFP91在AML细胞中广泛表达并且成功构建了敲低ZFP91的AML细胞株。2.敲低ZFP91可以抑制AML细胞增殖,促进AML细胞凋亡。3.ZFP91在不改变RIP1 m RNA水平的情况下调节RIP1的蛋白表达水平。4.ZFP91与RIP1之间存在相互作用,并且可以抑制RIP1泛素化依赖的蛋白酶体降解途径。结论:ZFP91通过抑制RIP1泛素化依赖的蛋白酶体降解途径,进而调控AML细胞的增殖和凋亡。ZFP91具有成为AML新的治疗靶点的潜力。
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