【摘 要】
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细胞周期蛋白Cyclin D1和周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂p16分别是细胞周期G1/S转换的正负调节因子。在正常情况下,Cyclin D1和p16保持平衡,但在肿瘤细胞中,却存在Cyclin D1的
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细胞周期蛋白Cyclin D1和周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂p16分别是细胞周期G1/S转换的正负调节因子。在正常情况下,Cyclin D1和p16保持平衡,但在肿瘤细胞中,却存在Cyclin D1的过量表达和p16的广泛失活。由于Cyclin D1的过量表达和p16的失活在肿瘤细胞中同时存在,而且它们的下游分子都是CDK4/6,所以同时抑制Cyclin D1的活性和恢复p16的功能,可以使对CDK4/6的抑制作用得到叠加,因此开展它们的联合治疗可能是一个可行的基因治疗策略。胞内抗体技术是基于抗体工程和胞内信号传导而衍生出来一项新的实现细胞内重要靶蛋白表型敲除的技术。在实验中,我们将前期构建的靶向Cyclin D1的内质网滞留型的胞内抗体基因和野生型p16基因分别单独和联合导入Cyclin D1过量表达和p16纯合缺失的MCF-7细胞中。实验发现,这些外源基因在细胞中都得到表达,并且表达的胞内抗体能与细胞内的Cyclin D1结合。同时发现,它们的转染都能引起细胞G1期的阻滞,诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖,而且联合转染比单独转染效果更显著。这为基因的联合治疗开辟了新的途径,具有一定的应用价值。
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