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目的运用免疫法制备溃疡性结肠炎大鼠模型,综合观察加味柴芍六君颗粒对实验大鼠T淋巴细胞和白介素-2的影响。运用化学染色和计算机图像分析仪,探讨溃疡性结肠炎的病理改变,探讨该药在提高免疫细胞和提高结肠溃疡愈合的作用机理,以及对白介素-2在溃疡性结肠炎的影响。为该药作为治疗溃疡性结肠炎的新药在临床推广应用提供依据。
方法健康Wistar大鼠90只,雌雄各半,体重约200g±20g左右,购于广西医药研究所实验动物中心,在实验室内正常饲养1w,确认为健康大鼠。制作免疫(UC)大鼠模型,称重,标记,随机分为6组,每组15只(雌雄各半),分别为正常组、大剂量,中剂量,小剂量,(SASP)组,模型对照组。灌胃给药或蒸馏水10ml/kg,每日2次,连续5周,末次给药后禁食12小时,不禁水,称体重后,戊巴比妥钠麻醉,腹主动脉采血,用于T细胞亚群CD3、CD4、和CD8测定,IL-2的测定。取全部结肠,肉眼观察结肠变化,切取溃疡灶或溃疡疤痕及周围组织,用10%的甲醛液固定,按常规脱水,石蜡包埋,切片厚度5μm,进行HE染色,用北航彩色病理图文分析系统测量并记录。采用流式细胞仪检测大鼠血T淋巴细胞亚群,ELISA法检测大鼠IL-2的表达情况。
结果(1)T淋巴细胞CD3,正常组(92.36±6.82),大剂量柴芍六君颗粒组(95.20±6.65),中剂量柴芍六君颗粒组(75.61±5.62),小剂量柴芍六君颗粒组(73.44±5.14),柳氮磺胺砒啶(SASP)组(73.18±4.86)与模型对照组(66.05±7.15)相比有显著性差异(P<0.05、P<0.01)。
(2)T淋巴细胞CD4,正常组(53.64±5.90),大剂量柴芍六君颗粒组(52.51±5.19),中剂量柴芍六君颗粒组(42.59±5.07),小剂量柴芍六君颗粒组39.34±4.77),柳氮磺胺砒啶(SASP)组(39.46±7.79)与模型对照组(32.24±8.74)相比有显著性差异(P<0.05、P<0.01)。
(3)T淋巴细胞CD8,正常组(45.50±4.62),大剂量柴芍六君颗粒组(42.69±4.67),中剂量柴芍六君颗粒组(33.01±5.56),小剂量柴芍六君颗粒组(28.09±4.48),柳氮磺胺砒啶(SASP)组(33.72±5.32)与模型对照组(21.79±5.78)相比有显著性差异(P<0.05)。
(4)T淋巴细胞CD4/CD8,正常组(1.12±0.31),大剂量柴芍六君颗粒组(1.13±0.38),中剂量柴芍六君颗粒组(1.19±0.33),小剂量柴芍六君颗粒组(1.23±0.28),柳氮磺胺砒啶(SASP)组(1.21±0.39)与模型对照组(1.98±0.34)相比有显著性差异(P<0.05)。
(5)白介素2(IL-2),正常组(0.69±0.30),大剂量柴芍六君颗粒组(0.65±0.26),中剂量柴芍六君颗粒组(0.43±0.21),小剂量柴芍六君颗粒组(0.39±0.25),柳氮磺胺砒啶(SASP)组(0.38±0.20)与模型对照组(0.12±0.27)相比有显著性差异(P<0.05、P<0.01)
(6)溃疡指数,加味柴芍六君颗粒能明显降低溃疡指数,大剂量组溃疡指数为0级,中剂量组溃疡指数为1级,小剂量组溃疡指数为1级,SASP组溃疡指数为1级与模型组溃疡指数为9级相比有显著性差异(P<0.05)。
结论本实验结果表明,加味柴芍六君颗粒能提高免疫溃疡性结肠炎大鼠T淋巴细胞CD3、CD4、的含量,调整CD4/CD8的比值的作用,能使大鼠血T淋巴细胞亚群恢复平衡。提高IL-2的作用,从而促使溃疡修复。说明了加味柴芍六君颗粒对溃疡性结肠炎的发病和病情变化均有影响;并且能改善UC大鼠的免疫功能。细胞免疫缺陷在UC的发病中起着重要作用,且T细胞亚群分布的改变与疾病时期密切相关。因此,加味柴芍六君颗粒作为治疗溃疡性结肠炎的中药制剂,具有临床推广应用价值。