【摘 要】
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目的:探讨丹酚酸B镁盐（Magnesium lithospermate B,MLB）对博莱霉素（Bleomycin,BLM）诱导C57BL/6小鼠肺纤维化中赖氨酸羟化酶2（lysyl hydroxylase 2,LH2）表达和细胞外基质胶原沉积的影响及可能机制。方法:选取健康雄性C57BL/6小鼠,6～8周,体重（20±2g）,共48只,按随机数字表法分为将小鼠编号,分为正常对照组（Control
【基金项目】
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贵州省人民医院博士基金项目（GZSYBS[2018]01号）；
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目的:探讨丹酚酸B镁盐（Magnesium lithospermate B,MLB）对博莱霉素（Bleomycin,BLM）诱导C57BL/6小鼠肺纤维化中赖氨酸羟化酶2（lysyl hydroxylase 2,LH2）表达和细胞外基质胶原沉积的影响及可能机制。方法:选取健康雄性C57BL/6小鼠,6～8周,体重（20±2g）,共48只,按随机数字表法分为将小鼠编号,分为正常对照组（Control group,Ctrl组）、博莱霉素组（BLM group,BLM组）、MLB预防性干预组（Preventive intervention of MLB group,PM组）和MLB治疗性干预组（Therapeutic intervention of MLB group,TM组）;每组各12只。所有实验动物饲养于清洁级环境中。BLM组、PM组及TM组小鼠经一次性气管内滴注BLM（3.5mg/Kg）造模。Ctrl组小鼠和造模后的BLM组小鼠正常饲养,PM组小鼠造模后第1天开始予丹酚酸B镁盐5mg/（kg.d）腹腔内注射干预;TM组小鼠造模后第7天开始予丹酚酸B镁盐5mg/（kg.d）腹腔内注射干预。各组小鼠均于造模21天后腹腔内注射4%水合氯醛0.6m L麻醉处死。小鼠死亡后立即取出肺组织,迅速在冰生理盐水中漂去血液,将左肺叶固定于4%多聚甲醛以供制作HE染色观察肺组织病理结果,Masson染色观察胶原沉积;右侧肺置于-80℃冰箱保存,用于检测羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa）检测羟赖氨酰吡啶链（hydroxylysylpyridinoline,HP）、赖氨酰吡啶链（lysylpyridinoline,LP）含量,蛋白印迹（Western blot,WB）检测I型胶原蛋白（CollagenⅠ,COL I）、LH2、β-连环蛋白（β-catenin）、Wnt1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测Wnt1、LH2的m RNA表达水平。结果:（1）HE染色和Masson染色显示,Ctrl组小鼠肺泡结构正常,未见肺泡间隔增厚、炎细胞浸润和胶原沉积。BLM组小鼠肺泡结构损毁,肺泡间隔明显增厚,炎细胞浸润及间质增生,大量胶原沉积。经丹酚酸B镁盐干预后,相较于BLM组,TM组和PM组小鼠肺泡间隔增厚减轻,炎细胞减少,胶原沉积减少;并且相较于TM组,PM组小鼠肺组织上述病理表现改善更明显。（2）相较于Ctrl组,BLM组、TM组和PM组小鼠肺组织Hyp、LP、HP含量增高（均P＜0.05）;经丹酚酸B镁盐干预后,TM组和PM组Hyp、LP、HP含量较BLM组减少,且PM组减少幅度较TM组更多（均P＜0.05）。（3）相较于Ctrl组,BLM组、TM组和PM组小鼠肺组织Wnt1 m RNA、LH2 m RNA表达水平上调（均P＜0.05）;经丹酚酸B镁盐干预后,TM组和PM组LH2 m RNA表达水平较BLM组下调,且PM组下调程度较TM组更明显（均P＜0.05）;但BLM组、TM组和PM组各组间Wnt1 m RNA表达水平无明显差异（均P＞0.05）。（4）相较于Ctrl组,BLM组、TM组和PM组小鼠肺组织Wnt1、β-catenin蛋白表达增加（均P＜0.05）。经丹酚酸B镁盐干预后,相较于BLM组,TM组和PM组β-catenin蛋白表达减少,且PM组减少程度较TM组更明显（均P＜0.05）;但BLM组、TM组和PM组各组间Wnt1蛋白表达无明显差异（均P＞0.05）。（5）相较于Ctrl组,BLM组、TM组和PM组小鼠肺组织CollagenⅠ、LH2蛋白表达增加（均P＜0.05）;经丹酚酸B镁盐干预后,相较于BLM组,TM组与PM组CollagenⅠ、LH2蛋白表达减少,且PM组减少程度较TM组更明显（均P＜0.05）。结论:（1）丹酚酸B镁盐减轻了BLM诱导的C57BL/6小鼠的肺纤维化病变,丹酚酸B镁盐预防性干预组比丹酚酸B镁盐治疗性干预组肺纤维化病变程度更轻。（2）丹酚酸B镁盐可抑制LH2表达,同时减少HP、LP的形成,减少细胞外基质胶原合成和沉积。（3）丹酚酸B镁盐抑制LH2表达可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。
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