猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是严重影响养猪业的传染性病原体,在猪场引起高死亡率,患病猪出现严重的呕吐、腹泻和脱水症状。机体先天性免疫反应是宿主抵抗病原微生物感染的第一道防线,而PEDV侵入宿主细胞后,能够抑制机体先天性免疫反应。因此,深入了解病毒与宿主的相互作用,筛选出有效的抗病毒蛋白,并阐明其在抗病毒方面的作用,以便该病的治疗与防控。CCHC型锌指蛋白3(CCHC-type zinc finger protein 3,ZCCHC3)是指其C端有多个锌指结构域的一类蛋白,在生物体所有细胞和组织中都有表达。目前对于人ZCCHC3蛋白的抗病毒作用已经有所研究,相关研究表明ZCCHC3能够抑制多种病毒的复制,包括RNA病毒VSV、EMCV和SEV等,DNA病毒包括HSV-1和VACV等。但是猪源ZCCHC3编码蛋白对PEDV的增殖作用还不清楚。本研究通过建立用于检测PEDV含量的实时荧光定量RT-q PCR检测方法,并用该方法检测病毒在Vero细胞中不同时间点病毒含量的变化。通过构建真核表达载体p EGFP-ZCCHC3,脂质体瞬时转染Vero细胞,让其在细胞中瞬时过表达,用12孔板进行细胞培养,并摸索其转染条件。用PEDV感染过表达ZCCHC3蛋白的细胞,通过Western blot和RT-q PCR方法检测细胞中PEDV含量;为进一步研究ZCCHC3蛋白对PEDV吸附和内化的作用,PEDV感染过表达ZCCHC3蛋白的细胞,于4℃中孵育2h,通过RT-q PCR方法检测细胞上病毒含量,研究其在病毒吸附阶段的作用,相同方法感染细胞后,于37℃孵育2h,通过RT-q PCR检测细胞中病毒含量,研究其在病毒内化阶段的作用。最后通过RT-q PCR方法检测过表达ZCCHC3蛋白的细胞中IFN-β、ISG56、IL6、TNF-α和CXCL10的含量,研究其能否通过调节相关抗病毒因子的作用达到调控病毒复制的目的。结果显示,构建的PEDV实时荧光定量RT-q PCR检测方法具有较好的特异性,灵敏性与稳定性。通过荧光显微镜观察显示,在转染试剂为2μL/孔,真核表达载体p EGFP-ZCCHC3为1.5μg/孔,瞬时转染Vero细胞24h时,转染效率最高。与对照组相比,PEDV吸附的数量没有显著差异,但是显著抑制了PEDV内化,这些数据表明过表达ZCCHC3不会阻止病毒的吸附过程,但是可以阻止病毒内化。用RT-q PCR检测感染后不同时间点ZCCHC3转染细胞中PEDV的转录水平,Western blotting检测病毒N蛋白的表达。结果显示,在ZCCHC3过表达的细胞中,从6h到36h检测期间,病毒RNA的含量显著减少,同样,Western blotting结果显示,在36h时,ZCCHC3显著抑制PEDV N蛋白的表达,即ZCCHC3能够抑制病毒的复制过程。通过RT-q PCR方法检测病毒感染后细胞内参与天然免疫应答反应的抗病毒因子的含量,结果显示ZCCHC3能够上调IFN-β、ISG56、IL6、TNF-α和CXCL10的含量。综上所述,本研究初次揭示猪ZCCHC3蛋白能够抑制PEDV复制,同时研究表明ZCCHC3能够通过阻止病毒内化,达到抗病毒的作用,猪ZCCHC3还可以通过上调机体IFN-β等细胞因子的含量,参与抗病毒反应。这项研究是首次将ZCCHC3与PEDV复制联系起来,为丰富机体抗病毒基因谱、进一步阐明PEDV感染机制和开发新型抗病毒治疗药物提供理论支持。