论文部分内容阅读
目的：肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是世界上常见恶性肿瘤，占原发性性肝癌的90％以上。据2002年统计，全世界每年肝癌发病人数约为626000例，死亡598000例，其发病率在常见肿瘤中位列第6，而病死率则排第3位。我国肝细胞肝癌的发病率与死亡率高居世界第一位。我国每年新发肝癌人数约占全球半数以上，而死于肝癌人数约占全球肝癌死亡人数的50%-55%，肝癌死亡率在我国癌症病死率中排第2位。肝癌早期临床症状不明显，起病隐匿，但进展迅速，确诊时大多数患者已属局部晚期或已发生远处转移。肝细胞癌发生侵袭及远处转移严重影响了肝癌治疗的预后。因此，急需一种有效的抗肿瘤药物，来控制肝癌的侵袭及转移。肿瘤从原位癌到局部侵袭及远处转移的演变过程中，最重要的条件是细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)的降解，而ECM的降解需要多种蛋白水解酶类，其中基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinases,MMPs）是降解细胞外基质的主要作用酶。由于细胞外基质的基本骨架是由IV型胶原组成,而明胶酶(MMP-2和MMP-9)是目前为止唯一可降解IV型胶原的一种蛋白水解酶,其通过破坏细胞外基质的降解平衡，进一步促进癌细胞突破细胞外基质和基底膜,发生局部侵袭和远处转移,因此在肿瘤的侵袭及转移过程中，明胶酶发挥着重要的作用。姜黄素类药物（姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素）是从姜黄属植物根茎中提取的化合物。去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素为姜黄素的衍生物，三者具有相似的药理作用，尤其在抗肿瘤方面。研究显示，姜黄素及其衍生物作用于人纤维肉瘤HT1080细胞，可抑制MMP-2、MMP-9蛋白的表达，且呈剂量依赖性。而姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对人肝癌细胞HepG2中MMP-2、MMP-9蛋白表达的是否有同样的抑制作用，目前研究较少。本实验初步探讨姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对人肝癌细胞HepG2中MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。方法：1常规培养人肝癌细胞株HepG2；流式细胞术(FCM)检测细胞周期的分布情况：收集不同浓度的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（20、40μmol/L）分别处理24h后的肝癌细胞HepG2，在流式细胞仪上机检测细胞周期，应用软件进行分析；2Western-Blot方法测定不同浓度的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（20、40μmol/L）分别作用于HepG2细胞24h后，HepG2细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达的变化，以及相同浓度姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（40μmol/L）分别刺激肝癌细胞株HepG224小时，比较三种药物对该细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达影响的作用强弱。结果：1FCM检测结果显示：不同浓度的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（20、40μmol/L）处理肝癌细胞HepG2细胞24小时后，与空白对照组相比，三种药物均呈现：随药物浓度的增加，HepG2细胞在G0/G1期分布明显增多(P<0.05)，S期与G2/M期细胞比例下降(P<0.05)，呈现G0/G1期阻滞；相同浓度的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（40μmol/L）处理肝癌细胞HepG2细胞24小时，三种药物诱导肝癌细胞HepG2细胞阻滞在G0/G1期能力的强弱顺序无明显差别(P＞0.05)。2Western-Blot方法检测不同浓度的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（20、40μmol/L）分别作用于HepG2细胞24h后，与空白对照组相比，三种药物各浓度组MMP-2、MMP-9蛋白的表达均受到抑制。且呈浓度相关性(P<0.05)。3Western-Blot方法检测相同浓度姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素（40μmol/L）分别刺激肝癌细胞株HepG224小时，三种药物抑制MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达作用的强弱顺序均为：双去甲氧基姜黄素＞去甲氧基姜黄素＞姜黄素(P<0.05)。结论：1姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素均可诱导人肝癌HepG2细胞阻滞在G0/G1期；其诱导肝癌细胞HepG2细胞阻滞在G0/G1期能力的强弱顺序无明显差别。2姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素均可下调人肝癌细胞HepG2中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。其对MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用：双去甲氧基姜黄素＞去甲氧基姜黄素＞姜黄素。