乳腺癌患者的腋窝淋巴结状况是一个重要的治疗及预后指标,腋窝淋巴结的清除被当作乳腺癌手术治疗的一个标准步骤。目前的研究显示哨兵淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy,SLNB)能够替代腋窝淋巴结清扫术,如果哨兵淋巴结阳性,则行腋窝淋巴结清扫,所以对哨兵淋巴结的检测非常重要,本实验的目的是建立一种快速、准确、客观的判断乳腺癌哨兵淋巴结转移的检测方法,以指导临床治疗、提高患者的生活质量。方法:1、通过美蓝染色法获取30例早期乳腺癌患者的哨兵淋巴结,将淋巴结均分为四份(a、b、c、d),a、c送常规病理学检查,b、d标号放置于-80℃冰箱冻存。2、培养乳腺癌细胞系及淋巴瘤细胞系的细胞,进行环介导的等温扩增反应检测CK-19基因表达的差异性。3、在环介导的等温扩增反应基础上加入逆转录酶,对病理学阳性的淋巴结进行检测,验证该方法的可行性。4、优化条件、缩短反应时间,并批量验证。结果:1、30例患者共检出哨兵淋巴结76枚,其中阳性淋巴结23枚,平均每例检出2.53枚(76/30),阳性率30.3%(23/76)。2、CK-19基因在乳腺癌等上皮来源的肿瘤中特异性表达,在正常淋巴结中检测到CK-19基因表明有乳腺癌肿瘤细胞转移。3、三枚阳性淋巴结行逆转录环介导的等温扩增反应均能检测到CK-19基因,表明有肿瘤转移,与病理切片HE染色检查结果吻合。4、优化实验条件后可以使总体反应时间小于1h,批量验证结果显示逆转录环介导等温扩增CK-19基因检测哨兵淋巴结的阳性率为44.7%,病理切片HE染色为30.3%,相比之下前者提高了14.4%。结论:通过逆转录环介导的等温扩增反应扩增CK-19基因,可以快速、准确、客观地判断乳腺癌患者哨兵淋巴结状况,具备良好的应用前景。