【摘 要】
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干扰素诱导跨膜蛋白具有抗增殖、抗肿瘤和抗病毒等功能。本研究采用荧光定量PCR、原核表达纯化、免疫组织化学、ELISA、Western Blot和免疫荧光检测等方法对牦牛IFITM1/2/3基因的表达及功能进行初步探究。主要结果如下:牦牛IFITM1基因cDNA序列为546 bp,其中编码区为375 bp,编码124个氨基酸。牦牛IFITM1基因在1日龄、15月龄和5岁龄牦牛肝中的m RNA水平显著
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干扰素诱导跨膜蛋白具有抗增殖、抗肿瘤和抗病毒等功能。本研究采用荧光定量PCR、原核表达纯化、免疫组织化学、ELISA、Western Blot和免疫荧光检测等方法对牦牛IFITM1/2/3基因的表达及功能进行初步探究。主要结果如下:牦牛IFITM1基因cDNA序列为546 bp,其中编码区为375 bp,编码124个氨基酸。牦牛IFITM1基因在1日龄、15月龄和5岁龄牦牛肝中的m RNA水平显著高于脾、肺和肾（P＜0.05）。IFITM1蛋白在3个生长阶段牦牛肝中均有表达并定位于肝细胞膜。成功表达牦牛IFITM1蛋白,分子量约为22.593 k Da,添加10μg/m L牦牛IFITM1蛋白后,牦牛肝细胞和HepG2细胞活性受到显著抑制（P＜0.05）,牦牛肝细胞BCL2/BAX、Cdk1和m OTR基因的m RNA水平极显著降低（P＜0.01）,BAX蛋白水平极显著升高（P＜0.01）,HepG2细胞BCL2/BAX、Cdk1和MMP9基因的m RNA水平极显著降低（P＜0.01）。牦牛IFITM2基因cDNA序列为602 bp,其中CDS区为381 bp,编码126个氨基酸。牦牛IFITM2基因在1日龄、15月龄和5岁龄牦牛脾中均有表达。成功表达牦牛IFITM2蛋白,分子量约为33.680 k Da。添加牦牛IFITM2蛋白（0.1和1μg/m L）后,HepG2细胞的增殖活性和迁移能力受到显著抑制（P＜0.05）,BCL2/BAX和m TOR基因的m RNA水平显著降低（P＜0.05）,而BAX基因的m RNA水平极显著升高（P＜0.01）。BAX蛋白水平在1μg/m L牦牛IFITM2蛋白处理后也显著升高（P＜0.05）。构建小鼠肿瘤模型,临床症状、组织病理和免疫器官指数等结果均表明牦牛IFITM2蛋白可以减轻肺部的病理损伤。IFITM2组肺中Ki67蛋白水平显著低于模型组,而模型组肺中Ki67蛋白水平显著高于对照组（P＜0.05）。牦牛IFITM3基因cDNA序列为578 bp,其中CDS区为441 bp,编码147个氨基酸。牦牛IFITM3基因在肝中的m RNA水平极显著高于心、脾、肺和肾（P＜0.01）。牦牛IFITM3蛋白定位于牦牛肝细胞质膜。成功表达牦牛IFITM3蛋白,分子量为19.5 k Da。添加10μg/m L牦牛IFITM3蛋白处理后,HepG2细胞增殖活性、克隆形成能力和迁移能力均受到显著抑制（P＜0.05）,HepG2细胞线粒体浓缩、嵴增宽和双层膜密度增加。同时VDAC-2、VDAC-3和p53基因的m RNA水平极显著升高（P＜0.01）,而GPX-4基因m RNA水平极显著降低（P＜0.01）。添加牦牛IFITM3蛋白（10和20μg/m L）后,巨噬细胞活性显著升高（P＜0.05）,IL-1β、IL-6和TNF-α基因的m RNA水平显著降低,IL-10基因的m RNA水平显著升高（P＜0.05）。添加牦牛IFITM3蛋白（10和20μg/m L）后巨噬细胞分泌IL-6和TNF-α的含量显著降低（P＜0.05）。抑菌试验表明牦牛IFITM3蛋白可以抑制肺炎克雷伯菌,MIC值为16μg/m L。构建细菌感染小鼠模型,临床症状、组织病理、免疫器官指数和血清生化指标等结果均表明注射牦牛IFITM3蛋白可以预防细菌感染,病理损伤程度相对于感染组明显减轻。感染组IL-1β、IL-6、TNF-α、TRAF6和TLR4基因的m RNA水平显著低于对照组,但IFITM3组IL-1β、IL-6、TNF-α和TLR4基因的m RNA水平显著高于感染组（P＜0.05）。综上所述,以上结果有利于进一步探究IFITM蛋白的功能。
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