苎麻atp2基因RNA干扰表达载体的构建及其干扰效果初步研究

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FlFo-ATP合成酶在线粒体中作为第V复合体参与电子传递链,是合成ATP的重要复合酶,其中F1部分的β亚基,是ATP合成与水解的关键位点,在高等植物中由核基因atp2基因编码,在各物种问高度保守。ATP合成酶分布异常或ATP供应不足,常伴随着雄性不育发生,但由于植物雄性不育是一个复杂的生物学过程,其作用机制目前还不清楚。本研究,通过克隆苎麻保持系‘GS13-X2’的atp2基因片段,构建RNA干扰表达载体,以农杆菌介导转化苎麻及烟草获得以下研究结果:(1)通过引物筛选,克隆到苎麻保持系’GS13-X2’的atp2基因片段,构建苎麻atp2基因RNA干扰表达载体,通过序列比对确认载体构建成功。(2)将构建好的RNA干扰表达载体,通过农杆菌介导转化苎麻,结果苎麻叶盘全部褐化死亡未能获得转基因苎麻植株,苎麻的遗传转化体系还有待优化。(3)将所构建的苎麻atp2基因RNA干扰表达载体转化普通烟草,获得转基因烟草7株,通过qRT-PCR验证其atp2基因的相对表达量均比对照组烟草低。(4)普通烟草沉默atp2基因之后植株变矮小,叶绿素分布不均,易感病,其花结构与对照组相比花冠筒较短,雄蕊不能伸出花冠筒喉部,雌性生殖器官无明显异常。(5)通过花粉萌发实验,测得转基因烟草花粉萌发率较对照组烟草下降了33.26%,花粉管长度下降了28.68%,转基因烟草表现出部分雄性不育。(6)检测烟草叶片及大花蕾的脯氨酸含量及SOD活性,结果表明转基因烟草大花蕾中的脯氨酸含量比对照组低33.4%,而叶片中的脯氨酸含量相比对照组高95.08%;转基因烟草叶片及大花蕾的SOD活性高于对照组烟草。(7)转基因烟草自交并收获部分种子,种子发芽率较对照组烟草下降了74.23%。本研究通过构建atp2基因RNA干扰表达载体,以农杆菌介导转化苎麻及烟草,终获得转基因烟草7株,在植株形态、花粉育性、种子萌发、脯氨酸含量及SOD活性等方面与对照组表现出显著差异。
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