【摘 要】
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目的:构建重组乙酰胆碱受体α亚单位-BirA识别多肽序列基因(pcDNA3.1-AChRα-BirA)并对其进行真核基因表达。方法:设计引物生物素蛋白连接酶(BirA)识别多肽序列基因。将载体p
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目的:构建重组乙酰胆碱受体α亚单位-BirA识别多肽序列基因(pcDNA3.1-AChRα-BirA)并对其进行真核基因表达。方法:设计引物生物素蛋白连接酶(BirA)识别多肽序列基因。将载体pcDNA3.1-AChRα经限制性核酸内切酶EcoRv单酶切后,用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收并纯化,与BirA识别多肽序列基因连接。将连接产物转化至感受态细胞E.coli DH5α并扩增,再用EcoRv单酶切检查BirA识别多肽序列基因插入的正确性,并测序验证,然后将构建成功的载体在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达。表达产物以绿色荧光标记,经激光扫描共聚焦显微镜验证。结果:电泳检查发现了大小为63 bp的条带,并测序验证了插入的基因序列为BirA识别多肽序列基因。转染后,经激光扫描共聚焦显微镜可观察到CHO细胞膜上的绿色荧光。结论:成功构建了AChRα-BirA识别多肽序列基因重组载体,并在CHO细胞中很好表达。本实验为下一步构建AChRα四聚体并作为抗原检测乙酰胆碱受体抗体奠定了基础。
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