论文部分内容阅读
乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE，EC 3.1.1.7)是一种B型的羧酸酯酶，它在神经胆碱能突触部位和神经肌肉接头处迅速水解和灭活神经递质乙酰胆碱。本研究最近报道了在各种细胞类型的细胞系被诱导凋亡的过程中，AChE都会被诱导表达，但是凋亡过程中AChE表达上升的机制却不清楚。
本研究证明在293T细胞凋亡过程中JNK(the cJun-N-terminal kinases)介导了突触型AChE(synaptic AChE，AChE-S)的表达升高。用H2O2处理293T细胞，结果显示H2O2诱导的293T细胞凋亡是caspase-3依赖型的。在这一凋亡过程中，突触型AChE的mRNA水平和蛋白水甲都明显上升，同时JNK被激活。H2O2诱导的AChE表达上升是由JNK信号通路介导的，因为ERK通路的抑制剂pd98059和p38通路的抑制剂sb203580不能抑制H2O2诱导的AChE表达上升，而JNK信号通路的抑制剂sp600125可以抑制H2O2诱导的AChE表达上升。过表达HA-JNK可以促进H2O诱导的AChE表达上升，而转染DN-JNK(JNK的dominant negative突变体)则抑制H2O2诱导的AChE表达上升。这些结果都表明AChE在过氧化氢(H2O2)诱导凋亡过程的表达受到JNK信号通路调控。
进一步研究发现，在H2O2诱导的293T细胞凋亡过程中JNK信号通路对AChE的调控是通过在基因转录水平上调控AChE启动子活性来实现的。H2O2诱导的293T细胞凋亡过程中AChE启动子活性明显上升。JNK的抑制剂SP600125可以抑制H2O2诱导的AChE启动子活性上升，DN-JNK也可以抑制H2O2诱导的AChE启动子活性上升。突变实验表明在AChE启动子上响应JNK的顺式作用元件主要是位于-1565/-1569区域的AP1类似元件(ALE)和位于-2185/-2177区域ATF2元件。凝胶延滞(EMSA)实验表明c-jun和ATF2都可以结合到ALE和ATF2元件上，但c-jun与ALE的结合能力更强；而ATF2与ATF2元件的结合能力更强。本研究用染色质免疫沉淀实验(ChlP)也得到了相似的结果，进一步验证了凝胶延滞实验的结果。
以上的研究都表明H2O2诱导的凋亡过程中AChE表达上升是通过JNK/AP1/ATF2信号通路调控的。