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第一部分BMP-4和Ki-67在PRL腺瘤中的表达及临床意义目的：探讨骨形态生成蛋白4(（Bone morphogenetic protein 4，BMP-4）和细胞核增殖相关抗原Ki-67在泌乳素腺瘤中的表达及与腺瘤侵袭性的关系。方法：应用免疫组织化学和原位杂交技术检测37例PRL腺瘤及8例正常垂体组织中BMP-4mRNA、BMP-4和Ki-67蛋白的表达水平，并对三者的表达水平的关系进行统计分析。结果：8例正常垂体组织的BMP-4和Ki-67表达均为阴性：37例PRL腺瘤中，BMP-4mRNA、BMP-4表达水平与PRL腺瘤的侵袭性呈正相关（r=0.885，P＜0.01）；Ki-67在2～3级与0～1级的表达水平有显著性差异（P＜0.05），但BMP-4mRNA、BMP-4的表达较Ki-67更具灵敏性（P＜0.05）。结论：BMP-4在PRL腺瘤中呈特异性高表达，且与PRL腺瘤侵袭性呈正相关。提示检测BMP～4可以作为判断PRL腺瘤的侵袭性的一个重要指标。第二部分BMP-4对原代培养泌乳素腺瘤细胞的PRL分泌和细胞增殖影响的体外实验研究目的：通过体外细胞培养实验，探讨BMP-4对原代泌乳素腺瘤细胞的PRL分泌和细胞增殖的影响。方法：选取经临床和病理证实的泌乳素腺瘤标本10例，分为两组，一组为对溴隐亭敏感的垂体瘤细胞（5例），另一组为不敏感型（5例）。每例标本进行原代细胞的培养，用不同浓度的BMP-4对PRL腺瘤细胞进行诱导，在不同时间观察细胞形态的变化，并用放射免疫的方法测量培养基中PRL激素的浓度。结果：浓度为5ng／ml的BMP-4培养基可促进泌乳素腺瘤细胞的激素分泌，在浓度为20ng／ml达到最大效应。BMP-4对细胞促分泌的效应在3d时开始出现。在促进激素分泌的同时，BMP-4促进泌乳素腺瘤细胞的增殖，但在浓度为50ng／ml时，BMP-4的促激素分泌作用开始下降；浓度为100ng／ml时，PRL腺瘤细胞形态上开始出现调亡。BMP-4的促PRL分泌的效应和促进肿瘤细胞增殖的上述作用，在敏感组和不敏感组泌乳素腺瘤中没有显著差异。结论：外源性的BMP-4对体外培养的泌乳素腺瘤细胞有促进细胞分泌PRL激素的作用，而且这种作用是通过诱导泌乳素腺瘤细胞的细胞增殖而实现的，对敏感型和不敏感型的泌乳素腺瘤细胞的作用是相同的。BMP-4与泌乳素腺瘤的发病机制密切相关，可能是PRL腺瘤细胞内信号传导中重要的一环。第三部分BMP-4拮抗剂Noggin诱导PRL腺瘤细胞调亡的实验研究目的：探讨BMP-4的拮抗剂Noggin诱导人PRL腺瘤细胞的调亡。方法：体外原代培养PRL腺瘤细胞后，用不同浓度的Noggin处理肿瘤细胞，用MTT法算出Noggin的IC50值；用相应浓度Noggin诱导PRL腺瘤细胞后，分别在24h、48h和72h用细胞免疫组化、Western blot和RT-PCR检测分析BMP-4蛋白和BMP-4mRNA的表达情况。用透射电镜、流式细胞仪观察检测经Noggin处理后PRL腺瘤细胞形态和细胞周期改变，计算调亡率。结果：MTT法测定Noggin对PRL腺瘤细胞的IC50值为18βg／ml，不同浓度的Noggin对PRL腺瘤细胞的生长具有抑制作用，并呈剂量—效应关系。Noggin处理PRL腺瘤细胞后，Annexin V标记的凋亡细胞增多，并呈现时间依赖性非线性方式。电镜观察到，Noggin作用24h、48h时，细胞形态无明显改变；作用72h时，细胞逐渐开始表现出调亡形态，并可见典型的调亡细胞。细胞免疫组化、Western blot显示，Noggin可使BMP-4蛋白表达下降；24h时BMP-4的表达与加Noggin前无差异（P＞0.05），48h和72h时的表达与加药前相比显著降低（P＜0.05）。RT-PCR检查可见到加入Noggin后，在24h、48h和72h时，BMP-4mRNA基因扩增条带亮度逐渐减弱。结论：BMP-4的拮抗剂Noggin呈剂量依赖性抑制PRL腺瘤细胞的生长，调控PRL腺瘤细胞的BMP-4基因的表达；并能诱导PRL腺瘤细胞发生凋亡，在体外具有抗PRL腺瘤的作用。