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牛樟芝为原产于台湾的珍稀药用真菌,含有多种具有抗癌抗炎活性的物质,已被多方研究证实其具有良好的保肝护肝作用,在中国大陆和台湾均具有广阔的市场前景和药用价值。牛樟芝中所含有的4-乙酰基安卓奎诺尔B(4-AAQB)为已被证实的具有良好抗癌活性的泛醌类小分子物质,且其无毒副作用。基于此,利用液体深层发酵法生产牛樟芝及4-AAQB具有十分重要的意义。本研究完成牛樟芝生物量积累培养条件的探索和高产4-AAQB培养条件的探索,并初步进行了分段发酵的工艺研究,主要工作介绍如下:1、本文以形成形态最好,生物量最高的牛樟芝小球种子为目标,探索了牛樟芝孢子培养形成小球的条件。结果如下:葡萄糖20 g/L,蛋白胨 10 g/L,KH2PO4 0.75 g/L,MgS04 1.5 g/L,装液量 100 mL/250 mL,温度28℃,转速150rpm,培养5天。2、探索了牛樟芝生物量富集影响因素的优化实验,结果如下,培养基组成和含量:乳糖70g/L,蚕蛹粉40g/L,玉米浆30g/L,VB50.3g/L,K2HPO40.5g/L,MgSO40.5g/L。条件如下:转速 130rpm,pH=5,装液量80 mL/250 mL,接种量10%。可得到牛樟芝菌丝体干重12 g/L,培养时间缩短至8天。3、探索了牛樟芝产4-AAQB影响因素的优化实验,结果如下,培养基组成和含量:果糖55g/L,蛋白胨40g/L,牛肉膏30g/L,VC 0.3g/L,K2HPO40.5g/L,MgSO40.5g/L。条件如下:转速 170rpm,pH=7,装液量120 mL/250 mL,接种量25%。在该条件下可得牛樟芝干重4.5g/L,4-AAQB产量稳定可以获得2.2mg/g,4-AAQB产量提升了 11倍,且发酵周期缩短至20天,周期缩短了 30%。4、探究了牛樟芝对不同固定化载体的利用情况,得到了最合适的载体为化纤网布。得到结果如下:最适网布面积5 cm*25 cm,最适放置方式:褶皱放置,最适接种量:0.6 mL,此时牛樟芝在载体上良好生长,生物量与游离培养相当。5、探索了牛樟芝在5L发酵罐中的发酵情况及进一步对上罐过程进行控制的发酵情况。得到牛樟芝在5L罐中的发酵过程和各项生理指标的变化。其中网布发酵法可以同时得到较高牛樟芝生物量和同时得到较高4-AAQB产量。利用网布发酵法,在第8天进行培养基换用,发酵结束时可得到菌体干重约8.6g/L,其中4-AAQB含量:1.2 mg/g。6、利用单因素优化法,分别优化了 4-AAQB提取方法和提取方法中的影响因素。得到振荡提取法为最合适的提取方法。所得结果为:30℃,转速150rpm,溶剂为90%乙醇,料液比1:20(g/mL),提取2小时,提取次数一次提取即可。比未优化之前提取率78%提高了 20%,时间降低了 93.75%,单位溶剂使用量降低了 60%,降低了溶剂成本。牛樟芝固定化发酵的初步探索和4-AAQB.提取方法的建立为牛樟芝之后的实验和工业化奠定了基础。