【摘 要】
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食用疫苗是通过细胞工程、基因改良等生物工程技术开发出来的食品,对增进人类健康和延长寿命具有积极的意义。果蔬食品极高的营养价值使其成为人类的生活必需品,同时也成为食用疫苗的常用表达载体。食用疫苗因其具有生产运输方便、成本低廉等优点具有广泛的应用前景,但在植物体内产生的保护性抗原蛋白表达量少、稳定性差是目前限制其推广的主要因素。本实验针对上述问题,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为研究对象,以烟草为宿
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食用疫苗是通过细胞工程、基因改良等生物工程技术开发出来的食品,对增进人类健康和延长寿命具有积极的意义。果蔬食品极高的营养价值使其成为人类的生活必需品,同时也成为食用疫苗的常用表达载体。食用疫苗因其具有生产运输方便、成本低廉等优点具有广泛的应用前景,但在植物体内产生的保护性抗原蛋白表达量少、稳定性差是目前限制其推广的主要因素。本实验针对上述问题,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为研究对象,以烟草为宿主表达植物,研究了所设计的不同重组多肽片段对EGFP合成量及稳定性的影响,主要结论如下:1.本实验通过PCR技术扩增质粒pBI-Le-AGP上部分基因片段获得目的蛋白GPI表达基因,大小为110 bp,通过In Fusion技术克隆后,整合质粒pBI-（SP）32-EGFP-GPI大小为14158 bp,整合质粒pBI-EGFP-GPI大小为13694 bp,经Xma I和Sac I双酶切验证,（SP）32-EGFP-GPI蛋白表达基因大小为1037 bp,EGFP-GPI蛋白表达基因大小为830 bp。2.经酶联免疫印记（Western blotting）法筛选后本实验共获得转基因植物株数为7株pBI-EGFP,4株pBI-（SP）32-EGFP,6株pBI-EGFP-GPI以及6株pBI-（SP）32-EGFP-GPI,分别标记并用于后续实验。3.EGFP蛋白分子量大小为27 KDa;由于所处合成阶段以及糖基化的影响,EGFP-GPI大小分别为33 KDa及37 KDa;（SP）32-EGFP分别为45 KDa,54 KDa,130 KDa;与（SP）32-EGFP-GPI分别为为40 KDa,50 KDa,135 KDa。4.表型分析结果证明EGFP、（SP）32-EGFP和（SP）32-EGFP-GPI外源基因的导入不会抑制烟草植株的生长,EGFP-GPI会影响植株的生长,但并不明显（p＞0.05）。5.酶联免疫法同时测定转基因植株蛋白得出重组蛋白表达量由高到低依次为（SP）32-EGFP-GPI、（SP）32-EGFP、EGFP、EGFP-GPI。6.共聚焦显微镜追踪EGFP可得出构建的32个-Ser-Pro重复肽序列基因的表达可以显著提高目的蛋白的产量,并在一定程度上促进蛋白结构的稳定性;GPI基因的表达可以引导重组蛋白的分泌,并将重组蛋白靶向固定于细胞膜,提高了重组蛋白的稳定性,减少蛋白降解,间接提高了重组蛋白表达量。
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