金露梅降糖活性化合物分离制备的研究

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金露梅(Potentilla fruticose L.),属于蔷薇科(Rosaceae)委陵菜属(Potentilla)落叶灌木,又名金老梅、金腊梅、药王茶等。本文结合金露梅化学成分研究基础采用层析柱、高效液相色谱、BUCHI快速纯化系统等方法富集制备金露梅中的3种具有降糖活性的化合物,并对其α-葡萄糖苷酶(AG)抑制剂活性进行测定,为金露梅具有降糖活性的相关标准品的富集制备提供可行的方法,同时金露梅资源开发利用提供理论基础。主要研究内容如下:1.金露梅叶药材粉碎,精密称取500 g,1:20 g/mL的料液比,75%乙醇,80℃回流提取3次,每次2 h,合并滤液,浓缩得到粗提物0.6 L,依次用10 L体积的质量分数为0、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%的甲醇洗脱,浓缩得到含有目标化合物的20%甲醇洗脱物,24.7019g。2.将含有目标成分的富集物通过制备高效液相色谱仪(DAC-50),采用DAC-HB50色谱柱,柱温30℃,45%甲醇等度洗脱,流速50 mL/min,检测波长254 nm和280 nm,进样量3 mL,进样间隔50 min,采用重复进样方式,分离制备得到目标化合物Quercetin-7-O-β-D-glucuronide(化合物1),质量为2481.8mg,经检测纯度为97.9516%。3.将除去化合物组分的混合物通过快速纯化系统(BUCHI Peveleris Prep),采用制备型色谱柱:江阴汉邦Dubhe C18(10 mm×250 mm 5μm),柱温30℃,20%甲醇等度洗脱,流速50 mL/min,检测波长254 nm和280 nm,进样量1.5 mL,进样间隔30 min,采用重复进样方式,分离制备得到目标化合物Gallic acid(化合物2)和3,4,6-tri-O-galloyl-β-D-glucose(化合物3),质量分别为18.6 mg和253.8 mg,经检测纯度分别为95.7021%和96.1672%。4.通过测定AG的抑制活性,化合物1、化合物2和化合物3的最大抑制率分别为94.672%、67.195%和96.340%,化合物1、化合物2、化合物3和对AG的IC50为0.259、0.831、0.021 mmol/L。化合物1为竞争性抑制剂,化合物2为反竞争性抑制剂,化合物3为非竞争性抑制剂。化合物1、化合物2、化合物3均显著的抑制AG的活性。
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