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轮状病毒（Rotavirus，RV）是引起婴幼儿和各种幼龄动物非细菌性腹泻的主要病原之一。在发展中国家，每年发生中度和严重腹泻的儿童约18000000人，死于轮状病毒感染的超过350000～390000人：在发达国家，由于R V腹泻导致脱水是儿童住院的一个常见病因。据估计，全球范围内，轮状病毒性疾病所造成的死亡率还没有降低。由于目前尚无治疗轮状病毒的特效药物，因此预防显得尤为重要。为此，世界卫生组织多次呼吁各国科学家研制开发有效的轮状病毒疫苗，并将其列为最优先发展的疫苗项目之一。据估计，如果使用有效的疫苗，每年在全世界可以挽救500000-1000000个儿童的生命。疫苗预防是控制此病的最佳选择。随着分子生物学深入研究，现已明确RV的2个主要外壳蛋白VP4和VP7不但是RV血清型分型依据，而且是主要的保护性抗原。因此，利用基因工程技术，将VP4、VP7基因表达出来作抗原，且VP7蛋白在抗原性和免疫原性方面强于VP4抗原，所以选用VP7作抗原已成为国内外轮状病毒基因工程苗研究的主要方向。目前，关于人的轮状病毒病的研究比较深入，但是有关动物轮状病毒病尤其是猪的尚处于起步阶段。 RV属呼肠病毒科，RNA基因组包含11个片段，每个片段各编码一种蛋白，6种结构蛋白即VP1—VP4、VP6、VP7，5种非结构蛋白即NSP1—5。关于RV感染的免疫应答已经在人和动物进行了若干研究，但是抵御RV的潜在保护机制至今仍不清楚。目前的研究证明，VP4和VP7是病毒外壳上的主蛋白抗原，可刺激机体产生相应的中和抗体。 本实验旨在国内外轮状病毒的基础上，采用现代分子生物学技术以测定猪轮状病毒VP7基因序列及其在动物细胞中的表达为主要研究内容，目的在于研究猪轮状病毒的分子生物学特性，为研制有效的核酸疫苗奠定基础。在本研究中，以猪轮状病毒总RNA为模板，RT-PCR扩增VP7基因，选用pGEM-T vector system成功克隆了猪轮状病毒VP7基因。通：过酶切鉴定和PCR鉴定，证实了所克隆的基因与目的基因大小一致。通过序列测定，所克隆的VP7基因序列与基因BANK中发表的VP7基因序列同源性为96％，表明该基因在猪轮状病毒中是高度保守的。然后将克隆至pGEM-T载体中的VP7基因与真核表达载体pVAX1进行连接、转化、克隆鉴定。然后，采用LipofectamineTM2000将真核重组表达质粒pVAXⅠ-VP7转染至MA-104细胞中，得到了表达。以荧光抗体检测法和RT-PCR法双重检测了真核重组表达质粒pVAXⅠ-VP7在