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杜鹃花类菌根(Ericoid mycorrhizas, ERM)是杜鹃花科几个属植物的营养根系与特定土壤真菌所形成的共生体结构。试验表明:菌根能极大地促进植物对氮源的吸收和利用,对于杜鹃花科植物而言,硝态氮条件下菌根的促进作用尤为突出,因此深入研究ERM菌根真菌对硝态氮的利用机理具有重要的理论价值和实际意义。本论文主要结论如下:(1)通过测定ERM真菌ZT-13、D和19在以硝态氮、铵态氮以及BSA为唯一氮源的MMN培养液(Melin-Norkrans Medium)中的生长量、含氮量、硝酸还原酶活性发现,树粉孢属ERM真菌生长偏好铵态氮和硝态氮,但也可利用有机氮,3个菌株均具有较好地利用硝态氮的能力,其中菌株19利用硝态氮的能力最强。在硝态氮和有机氮培养基上菌株19硝酸还原酶活性较高。(2)本试验首次以ERM真菌为材料,利用抑制性差减杂交成功构建了ERM真菌19在低浓度硝态氮诱导下的cDNA文库,共获得约1500个差减片段的阳性克隆,随机挑取300个克隆进行测序,最终获得223条单一序列,序列长度位于181bp-1007bp之间,平均长度509bp。经Blast分析发现:223个序列中功能已知序列占全部基因的41.26%,主要涉及物质合成与代谢、能量代谢、物质转运、信号转导、生物体抗性等生命活动。(3)利用RT-PCR法研究硝态氮转运和代谢基因在不同氮源条件下的表达变化,结果表明:所获得的ERM真菌中硝态氮代谢基因可能属于高亲和硝态氮转运代谢系统家族中的成员;并且该基因的表达受硝态氮以及低氮条件的诱导,被高浓度铵盐抑制。(4)当菌丝体转移至硝态氮条件下,经过不同处理时间,硝态氮转运蛋白基因和亚硝酸还原酶基因的表达模式相同,而硝酸还原酶基因的表达模式与前两者不同。三者表达模式与外生菌根中的研究结果不同,推测两者存在不同的硝态氮代谢模式。综上所述,ERM真菌具有较强的利用硝态氮的能力是由于ERM真菌具备硝态氮代谢的相关基因,该类基因受外源硝态氮以及低氮诱导表达。硝态氮代谢相关基因在外界氮源条件的调控下,生成相应的氮素代谢酶,从而发生一系列的酶促反应,完成ERM真菌硝态氮的吸收利用。