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赤霉素是一类重要的植物激素,它参与调节植物生长发育的各个阶段。真核基因的表达受多种因素的调控,其中启动子在转录水平上的调节作用至关重要。转录因子与基因启动子结合调控基因的表达。但是目前较多的研究在于分析GA20ox基因在赤霉素代谢途径中的作用,对拟南芥GA20ox基因家族上游顺式元件与启动子的详细分析较少,故以此展开研究并获得以下结果:(1)采用生物信息学分析了霉素关键酶基因家族,结果表明霉素关键酶基因家族具有相对集中的染色体分布;具有相似的内含子和外显子结构;基因家族成员进化关系越相近,模体和顺式元件则越保守且分布位置更接近。存在许多保守元件如组织器官特异性、光、激素响应元件;基因芯片分析表明赤霉素关键酶受激素调控,组织器官表达模式分析获得各基因表达谱,结果表明这些基因在各个组织部位均有表达,较高表达量集中在花与果荚。AtGA20ox基因家族分为2个亚类;AtGA20ox在花与果荚组织中的表达量最高;AtGA20ox基因启动子区域主要有光、激素顺式作用元件,同时具有多个MYB的结合元件。(2)通过酵母单杂交的方法,从拟南芥转录因子库中筛选到与AtGA20ox1启动子互作的转录因子AtMYB32。采用了CPRG法定量分析测定AtGA20ox1启动子与AtMYB32相互作用的强度,结果显示二者的相互作用强。(3)成功构建原核表达载体pCold TF/AtMYB32,探索融合蛋白表达的最佳诱导条件,结果表明IPTG终浓度0.6mmol/L、18℃诱导6h时获得融合蛋白的高效表达,可溶性分析表明融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达,通过亲和层析纯化,获得纯化上清总蛋白,并以Western blot检测证实获得了高纯度的重组融合蛋白。(4) AtMYB32含有两个R2R3的保守结合域,分析了AtMYB32基本理化性质,预测AtMYB32蛋白可能定位在细胞核,亚细胞定位证实AtMYB32位于细胞核中,基因芯片数据库与实时荧光定量PCR技术的分析组织表达模式,结果表明AtMYB32在各个组织均有表达,且均显示在花与果荚中表达较高。(5)构建了过表达载体35S::AtMYB32-GFP、pAtMYB32::GUS,并用浸花蕾法将其导入拟南芥,获得了35S::AtMYB32-GFP的转基因植株。(6)在光、激素、盐等胁迫处理下,分析AtMYB32基因表达量变化,结果显示AtMYB32受蓝光、红光、远红光的诱导,同时对激素与盐等逆境做出响应。