【摘 要】
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溶解性多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenases,LPMO)是一类在电子供体的存在下能够裂解结晶多糖(如纤维素或几丁质)的铜金属依赖酶;协同纤维素酶作用,能够大幅度提高纤维素酶的水解效率,具有重要的经济价值和应用前景。1.从NCBI数据库中筛选出Talaromyces atroroseus IBT 11181菌株的LPMO基因序列,送公司成功合成出编码LP
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溶解性多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenases,LPMO)是一类在电子供体的存在下能够裂解结晶多糖(如纤维素或几丁质)的铜金属依赖酶;协同纤维素酶作用,能够大幅度提高纤维素酶的水解效率,具有重要的经济价值和应用前景。1.从NCBI数据库中筛选出Talaromyces atroroseus IBT 11181菌株的LPMO基因序列,送公司成功合成出编码LPMO的基因片段。选用EcoR1和Hind111为酶切位点将该基因连接到pET-28a(+)载体上,构建重组表达载体。酶学性质分析表明:该LPMO的最适反应pH是5.0,最适反应温度是50℃。2.根据测得的酶学条件为基础,研究了重组菌的发酵条件。培养基条件优化方面,最适碳源和氮源分别为葡萄糖和蛋白胨,其最适浓度都是10g/L,最适磷酸盐添加量为60 mmol/L,最适Mg2+浓度为0.25 g/L;培养环境优化部分,培养液最适接种量为2%,250 mL摇瓶中最适装液量为40 mL;诱导剂条件优化部分,诱导该LPMO表达的最适诱导温度为16℃,IPTG浓度为0.08 mmol/L。最适条件下协同相同用量的纤维素酶降解纤维素时,比单一纤维素酶的水解产物还原性糖量提高60%。
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