加味小柴胡汤是以我国医圣张仲景所著《伤寒论》收载的“小柴胡汤”为基本方,加味黄连、生姜、白术、茯苓等组成,具有和解少阳、疏肝和胃之功效。近10余年来,东莞市中医院周爱军主任医师运用加味小柴胡汤临床治疗胃溃疡病人数百例,有效率达到90%以上,具有起效快和复发率低的特点,受到广大患者高度评价。本论文的研究内容是建立在临床疗效的基础上,采用中药化学、中药药理学、分子药理学及分析化学等多学科交叉的研究方法,对加味小柴胡汤方剂进行了抗溃疡有效物质部位筛选,以及有效物质部位组方的药效学和作用机理研究,并对各有效物质部位的化学成分进行了分析鉴定,初步诠释了该方剂药效物质基础,并为将其开发为中药新品种提供了现代科学依据。在我国传统中医和中药理论的指导下,将加味小柴胡汤复方视为整体,采用传统方法对其进行水煎液总提物的提取。并根据其化学成分极性大小,采用系统溶剂法对其进行部位的分离,将总提物分为挥发油物质、氯仿萃取物(生物碱类物质)、乙酸乙酯萃取物(酚酸类物质)、正丁醇萃取物(苷类物质)、水溶性物质和多糖等6个物质部位。以抗幽门螺旋杆菌活性作为指标,对全方水煎液及6个物质部位进行了生物活性筛选研究。抗菌试验结果表明,挥发油物质(亲脂性物质)、氯仿萃取物(生物碱类物质)、乙酸乙酯萃取物(酚酸类物质)和正丁醇萃取物(苷类物质)为加味小柴胡汤的有效物质部位群。建立无水乙醇诱导的小鼠胃溃疡模型、幽门结扎所致胃溃疡大鼠模型和醋酸诱导的大鼠慢性胃溃疡模型,以加味小柴胡汤有效物质部位配伍组方进行了药效学研究,并设立传统方法制备的加味小柴胡汤颗粒组进行药效学研究。抗胃溃疡药理试验结果表明,有效物质部位配伍组和加味小柴胡汤颗粒组与模型组比较,均能显著降低胃溃疡指数、胃液总酸度和胃蛋白酶活性,提高SOD活力,抑制脂质过氧化物MDA升高。本项研究结果表明,加味小柴胡汤有效物质配伍的药理效果能反映原方剂的药效作用。这对于采用现代科学方法阐释中药复方配伍协同作用的传统理论具有一定的意义。通过药理学与分子生物学的学科交叉研究方法,以醋酸所致大鼠胃溃疡模型为研究对象,对加味小柴胡汤有效物质部位组方的抗胃溃疡作用机理进行了研究。采用酶联免疫法和硝酸还原酶法测定PGE2、TNF-α、EGF及NO的含量,观察其对炎症及细胞的修复作用;采用Western blotting法,检测Bax,Bcl-2,cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达,观察其对细胞凋亡的影响;采用HE染色及免疫组化法,分析胃黏膜组织中HSP-70,p-AKT和PCNA蛋白的表达,以评估其细胞修复作用。研究结果表明:(1)经AIG给药处理后的醋酸模型大鼠胃黏膜组织内的PGE2、EGF及NO的含量显著升高,而TNF-α含量显著性下降,显示了抗炎和促进细胞增殖的作用;(2)Western blotting检测结果显示,AIG能上调醋酸模型大鼠胃黏膜组织中Bcl-2蛋白表达,下调Bax、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白表达,因而表明具有抑制细胞凋亡的作用;(3)免疫组化分析结果显示,AIG可以提高胃黏膜组织内HSP-70,p-AKT和PCNA蛋白的表达,因而显示了对细胞损伤的修复作用。综上所述,加味小柴胡汤有效部位群组方之所以具有良好的抗胃溃疡的药效作用,其作用机理是通过多途径共同发挥作用的结果。因此本项研究结果为加味小柴胡汤的临床疗效提供了科学的实验依据。通过现代仪器分析方法,对加味小柴胡汤有效部位群的化学成分进行了分析鉴定。采用GC-MS分析方法,从挥发油物质部位中分离出84种成分,鉴定了其中65个化合物,占萃取物总量的93%。采用LC-MS的方法,分别对氯仿萃取物质部位、乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取物质部位中化学成分进行了分析鉴定。从氯仿萃取物质部位中鉴定了4种化合物,从乙酸乙酯萃取物质部位中鉴定了27种化合物,从正丁醇萃取物质部位中鉴定了23种化合物。根据文献检索,很多被鉴定的化合物具有良好的生物活性,这对于诠释加味小柴胡汤的物质基础具有重要意义。