敲减CIRBP基因对肺腺癌A549、PC-9细胞恶性生物学行为的研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jianghui123789
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背景:目前肺癌在中国乃至全球范围内仍然是最常见的恶性肿瘤,并且其发病率和死亡率居高不下,给公共卫生造成了重大的癌症负担。而又在肺癌中最常见的病理组织学亚型是肺腺癌,因其起病隐匿,早期临床表现不典型,大多数患者发现时已处于晚期,早诊早治可以在很大程度上提高肺腺癌患者的存活率。近年来,大多数研究表明冷诱导RNA结合蛋白(Cold-inducible RNA-binding proteins,CIRBP)不仅参与正常的应激反应,而且还参与多种肿瘤类型的调控,其表达量还与肿瘤患者的生存预后相关。但是截至目前,在国内外关于CIRBP与肺腺癌发生发展中的作用少有研究。目的:本研究拟在体外细胞中,通过敲减CIRBP基因转染目的细胞,了解CIRBP基因表达水平对人肺腺癌A549和PC-9细胞生长、增殖、侵袭、转移和凋亡的影响,旨在探讨CIRBP与肺腺癌细胞恶性生物学行为间的关系,以期为CIRBP作为肺腺癌治疗靶点研究提供新方向。方法:用敲减CIRBP基因后的慢病毒分别感染A549和PC-9细胞,CIRBP敲减组为KD组,阴性对照组为NC组。在感染后72小时,使用实时荧光定量核酸扩增检测(Quantitative Real-time PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)方法检测CIRBP基因敲减效率。应用Cell Counting Kit-8细胞计数(CCK-8)、克隆形成实验、Celigo划痕实验、细胞侵袭检测实验和Annexin V/PI双染细胞凋亡检测实验了解感染后目的细胞的生长、增殖、侵袭、迁移和凋亡情况。结果:经慢病毒感染目的细胞72小时后,显微镜下观察显示细胞状态正常,未见细胞大量死亡现象,剩余细胞可进行后续实验。通过qPCR测定结果显示,在A549中CIRBP基因敲减效率达到73%,在PC-9中敲减效率为73.1%;WB结果显示,CIRBP在A549和PC-9细胞KD组中的表达相对于NC组均下调。CCK-8结果显示,KD组相对于NC组,A549和PC-9细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,A549细胞KD组(175.00±4.00)克隆形成数相对于NC组(228.00±3.00)明显减少(P<0.0001),PC-9细胞KD组(95.00±3.00)克隆形成数相对于NC组(142.00±2.00)明显减少(P<0.0001)。Celigo划痕实验结果显示,48小时后A549细胞KD组平均迁移率(22.49%±1.14%)低于NC组平均迁移率(27.13%±1.24%),P<0.001;8小时后PC-9细胞KD组平均迁移率(47.99%±1.83%)低于NC组平均迁移率(57.01%±2.23%),P<0.001。细胞侵袭检测实验结果示,A549细胞KD组平均侵入细胞数(121.074±1.701)和平均入侵倍数变化(0.792±0.011)均低于NC组平均侵入细胞数(152.889±1.018)和平均入侵倍数变化(1.000±0.007),P<0.0001;PC-9细胞KD组平均侵入细胞数(116.556±1.869)和平均入侵倍数变化(0.508±0.008)均低于PC-9细胞NC组平均侵入细胞数(229.259±3.888)和平均入侵倍数变化(1.000±0.017),P<0.0001。凋亡检测结果示,在A549、PC-9细胞中,KD组相对于NC组细胞凋亡率无明显变化(P>0.05)。结论:通过敲减CIRBP基因慢病毒成功感染肺腺癌A549、PC-9细胞,发现CIRBP在人肺腺癌细胞中的表达降低后,可显著抑制肺腺癌细胞的生长增殖和侵袭迁移能力,但对细胞的凋亡无明显相关性。表明CIRBP在调控肺腺癌的发生发展中起到重要作用中,其可能是治疗肺腺癌的潜在靶点和预后标志。
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