第一章 TNF-α基因启动子区多态性与多发性骨髓瘤相关性及对沙利度胺联合地塞米松治疗方案骨髓瘤患者预后的影响　　 背景及目的：尽管肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）启动子区-238和-308单苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）被认为是功能性的多态性位点，然而它与多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）]的患病风险目前仍无一致的结论。大大提高治疗效果的新药-沙利度胺通过影响TNF-α的生成，减少NF-k B的活化发挥抗骨髓瘤作用。因此本研究旨在观察TNF-α启动子区-238和-308多态性与多发性骨髓瘤发病风险的相关性及评估其多态性对沙利度胺联合地塞米松治疗方案的删患者疗效及预后影响。　　 方法：采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）-限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）方法检测了中国汉族210例多发性骨髓瘤患者和218例健康对照者的TNF-α启动子区-238和-308位点多态性状态，同时应用单变量和多变量分析方法评估98例接受沙利度胺联合地塞米松治疗方案的MM患者疗效及预后。　　 结果：TNF-α基因-308位点的GA基因型和GA+AA基因型降低MM的患病风险，差异有显著性P=0.01和P=0.02，是一种保护性的因素（OR0.51和0R0.55）。当联合TNF-α-238和TNF-α-308位点SNP基因型分析时，GG/GA基因型减少MM的发生风险（P=0.03）。TNF-α-238位点GA+AA基因型较GG型患者具有长的无进展生存时间（progression-free survival，PFS，P=0.009）和更长的总生存时间（overallsurvival，OS，P=0.088）。结合患者年龄、β2-M，TNF-α-238和-308基因型的多因素分析中，TNF-α-238具有独立的良好PFS预后意义（P=0.048）。然而，TNF-α-308的多态性状态无论在单因素及多因素分析中，均未观察到对治疗效果及预后的影响。　　 结论：TNF-α基因启动子区-308位点多态性与多发性骨髓瘤疾病相关，可降低MM患病风险；而TNF-α-238多态性GA+AA基因型对沙利度胺具有良好的疗效，并延长PFS和OS。因此，TNF-α基因启动子区多态性可作为潜在的评估骨髓瘤疾病患病风险及沙利度胺治疗删疗效和预后的分子标记。　　 第二章NF-k B信号通路相关基因多态性对多发性骨髓瘤疾病及基于硼替佐米治疗方案患者预后的影响　　 背景及目的：NF-κB是一组具有特殊DNA结合序列的转录因子，在MM细胞的周期调节、细胞生存、抗凋亡、细胞因子的产生等方面发挥重要作用。目前，通过阻断NF-κB通路为作用靶点的蛋白酶体抑制剂-硼替佐米（Bortezomib）已广泛应用于临床，大大提高了MM患者的反应率及生存期，然而所有患者都将最终复发、耐药，导致无法治愈。本研究旨在通过对NF-κB信号通路上的关键分子，IκBα、NFκB2和TRAF3基因的多态性位点检测，观察其与MM疾病发病的相关性，同时评估对基于硼替佐米治疗的MM患者预后的影响。　　 方法：根据NCBI及HapMap中基因标签所记录的最小等位基因频率（minor allelefrequency，MAF）在中国汉族人群比例>5％的原则，挑选IKBa、NFκB2和TRAF3基因26个SNP位点，采用飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionizationtime of fl ight，MALDI-TOF）分析技术，对中国汉族215例MM患者和208例健康者进行检测，同时评估上述位点多态性状态对基于硼替佐米治疗方案的94例骨髓瘤患者预后的影响。　　 结果：在所有检测位点中，去除不符合哈-温平衡（Hardy-Weinberg eguiliberum，HWE）及多态性基因型频率太少的3个位点（rs10131139、rs8023164和rs12435483），余下23个位点中，Iκ Bα基因的rs2233406和rs2233409位点多态性基因型与疾病相关，T等位基因为保护性基因，其优势比（OR）及95％CI分别为0.623，0.394-0.984，（P=0.042）和0.638，0.386-1.056，（P=0.079）。TRAF3基因中rs7143468的A等位基因具有增加MM患病风险的可能性（OR1.539，95％CI：0.968-2.448，P=0.068），而病例组中rs7143468A等位基因频率明显多于对照组（P=0.028），提示此类基因型可增加发病风险（OR1.539，95％CI：0.968-2.448，P=0.068），且病例组rs12147254的A等位基因发生频率明显少于健康组（33.5％vs51.0％，P<0.0001），因而降低疾病的发病风险。在单体型分析中，TRAF3基因单体型1[GAACAG]频率在MM组明显少于健康组，降低发病风险（P<0.0001，OR0.526）。余下的IKBa、TRAF3基因位点及所有NF k B2位点均未观察到多态性状态与发病风险的相关性。　　 TRAF3基因rs11160707位点GA+AA基因型较GG野生型PFS长（P=0.024）。NFκ B2基因rs12769316位点GA+AA基因型较GG野生型具有长的OS（P=0.038）；然而rs1056890位点CT+TT基因型较CC野生型其OS较短，表现预后不良（P=0.018），这可能是由于rs12769316位点GA+AA基因型患者在接受基于硼替佐米治疗方案时较野生型具有良好的总反应率（CR+VGPR+PR）（89.7％vs69.8％，P=0.038），而rs1056890多态性基因型的总反应率低于野生型（61.3％vs83.6％，P=0.018）。其余位点未观察到多态性基因型与野生基因型在治疗反应率及临床预后之间的差异。我们从多变量分析结果发现TRAF3基因rs11160707是独立的、良好的PFS预后因素（HR0.451，P=0.030）。　　 结论：NF-κ B信号通路的Iκ Bα和TRAF3分子表现出与骨髓瘤疾病的密切相关性，同时NFκ B2和TRAF3可影响基于硼替佐米治疗方案的患者的临床预后。因此，NF-k B信号通路相关的关键分子可作为潜在的评估MM疾病发生及预后的分子标记。